Что значит пролиферация: Пролиферация — это… Что такое Пролиферация?

  • 26.07.2021

Содержание

ГОМЕОСТАТИЧЕСКАЯ ПРОЛИФЕРАЦИЯ КАК ОСНОВА НЕИЗБЕЖНОГО ФОРМИРОВАНИЯ ТОТАЛЬНОГО ИММУНОДЕФИЦИТА | Козлов

1. Козлов В.А. Свободная внеклеточная ДНК в норме и при патологии // Медицинская иммунология. 2013. Т. 15, № 5. С. 399-412. [Kozlov V.A. Svobodnaya vnekletochnaya DNK v norme i pri patologii [Free, extracellular dna in norm and pathology]. Meditsinskaya immunologiya = Medical Immunology, 2013, Vol. 15, no. 5, pp. 399-412].

2. Heninger A.K., Theil A., Petzold C., Huebel N., Kretschmer K., Bonifacio E., Monti P. IL-7 abrogates

3. suppressive activity of human CD4+CD25+FoxP3+ regulatory T cells and allows expansion of alloreactive and autoreactive T cells. J. Immunol., 2012, Vol. 189, no. 12, pp. 5649-5658.

4.

Hickman P.S., Turka L.A. Homeostatic T cell proliferation as a barrier to T cell tolerance. Philos Trens R Soc Lond B Biol Sci., 2005, Vol. 360, no. 1461, pp. 1713-1721.

5. Kieper W.C., Burghardt J.T., Surt C.D. A role for TCR affinity in regulating na ve T cell homeostasis. J. Immunol., 2004, Vol. 172, no. 1, pp. 40-44.

6. Kimmig S., Przybylski G.K., Schmidt C.A., Laurisch K., M wes B., Radbruch A., Thiel A. Two subset of naive helper cells with distinct T cell receptor excision circle content in human adult peripheral blood. J. Exp. Med., 2002, Vol. 195, no. 6, pp. 789-794.

7. Koetz K., Bryl E., Spickschen K., O’Fallon W.M., Goronzy J.J., Weyand C.M. T cell homeostasis in patients with rheumatoid arthritis. Proc Natl Acad Sci USA, 2000, Vol. 97, no. 16, pp. 9203-9208.

8. Lario M., Munoz L., Ubeda M., Borrero M.-J., Martinez J. Defective thymopoiesis and poor peripheral homeostatic replenish-ment of T-helper cells cause T-cell lymphopenia in cirrhosis. J. Hepatology, 2013, Vol. 59, pp. 723-730.

9. Liu Y., Lai L., Chen Q., Song Y., Xu S., Ma F., Wang X., Wang J., Yu H., Cao X., Wang Q. MicroRNA-494 is required for the accumulation and function of tumor-expanded myeloid-derived suppressor cells via targeting of PTEN. J. Immunol., 2012, Vol. 188, pp. 5500-5510.

10. Nesic D., Vukmanoviċ S. MHC class I is required for peripheral accumulation of CD8+ thymic emigrants. J. Immunol., 1998, Vol. 160, no. 8, pp. 3705-3712.

11. Provinciali M. , Moresi R., Donnini A., Lisa R.M. Reference values for CD4+ and CD8+ T lymphocytes with naïve or memory phenotype and their association with mortality in the elderly. Gerontology, 2009, Vol. 55, pp. 314-321.

12. Sport s C., Hakim F.T., Memon S.A., Zhang H., Chua K.S., Brown M.R., Fleisher T.A., Krumlauf M.C., Babb R.R., Chow C.K., Fry T.J., Engels J., Buffet R., Morre M., Amato R.J., Venzon D.J., Korngold R., Pecora A., Gress R.E., Mackall C.L. Administration of rhIL-7 in humans increases in vivo TCR repertoire diversity by preferential expansion of na ve T cell subsets. J. Exp. Med., 2008, Vol. 205, no. 7, pp. 1701-1714.

13. Takeda S., Rodewald H.R., Arakawa H., Bluethmann H., Shimizu T. MHC class II molecules are not required for survival of newly generated CD4+ T cell, but affect their long0term life span. Immunity, 1996, Vol. 5, no. 3, pp. 217-228.

14. Van Belle T.L., Dooms H., Boonefaes T., Wei X.Q., Leclercq G., Grooten J. IL-15 augments TCR-induced CD4+ T cell expansion in vitro by in-habiting the suppressive function of CD25 high CD4+ T cells. PLoS One, 2012, Vol. 7, no. 9, e45299.doi:10.1371.

15. Weng N.P. Telomere and adaptive immunity. Mech Ageing Dev., 2008, Vol. 129, pp. 60-66.

16. Wrzesinski S.H., Wan Y.Y., Flavell R.A. Transforming growth factor-β and immune response: implication for anticancer therapy. Clin Cancer Res., 2007, Vol. 13, no. 18, pp. 5262-5270.

Маркеры апоптоза и пролиферации опухолевых клеток в динамике прогрессирования рака яичника

Одной из основных причин смертности в промышленно развитых странах являются злокачественные новообразования. При этом, согласно данным Международного агентства по изучению рака, к 2020 г. прогнозируется повышение заболеваемости злокачественными опухолями до 15 млн и возрастание смертности до 9 млн человек в год [16]. Анализ статистических данных о злокачественных новообразованиях в России за период с 1999 по 2004 г. показывает, что заболеваемость злокачественными опухолями яичника за этот период имела прирост 14,9% и переместилась по уровню смертности с 6–7-го места в 1999 г. на 5-е в 2004 г., заняв 3-е место по величине прироста [11].

К основным свойствам всех злокачественных опухолей относят повышенную способность к пролиферации, утрату способности к полной дифференцировке и апоптотической гибели, а также инвазивный рост и метастазирование [5]. Благодаря им неоплазма имеет преимущество перед нормальными клетками во время роста и выживания.

Если в здоровой ткани существует баланс между процессами пролиферации и гибели клетки, то в ткани опухоли имеет место автономная и неограниченная пролиферация клеток. При этом в трансформированных клетках возникает устойчивость к индукции апоптоза [9]. В результате генетических мутаций снижается способность трансформированных клеток активировать программу апоптоза, что, с одной стороны, способствует прогрессированию опухолевого процесса, а с другой — может стать причиной множественной лекарственной устойчивости [1]. В связи с этим в последнее время уделяется большое внимание изучению молекулярных маркеров, характеризующих апоптоз и пролиферацию при различных злокачественных новообразованиях [7, 8].

Ведущую роль в развитии апоптоза и регуляции клеточной пролиферации играет природный (Wt)

тип гена-онкосупрессора p53 и кодируемый им ядерный белок р53 [3]. Последний модулирует экспрессию генов, которые отвечают за репарацию ДНК, деление клеток и апоптоз [1, 19]. В значительной части злокачественных опухолей выявляют мутации в хромосоме 17 в области локализации генасупрессора р53 [4, 21].

Bcl-2 является одним из основных компонентов системы защиты клетки против факторов, вызывающих апоптоз. Известно, что Bcl-2 ингибирует р53-зависимый и независимый апоптозные метаболические пути. При этом способствует образованию в митохондриях ионных каналов, стабилизируя этим митохондриальную цитохром-оксидазу С и связывает белки, участвующие в апоптозе. Цитохром-оксидаза С способна инициировать активацию каскада каспаз и, как следствие, деградацию ДНК и апоптоз.

С состоянием основных регуляторных систем программированной клеточной гибели связаны неопластические, репаративные и пролиферативные процессы в тканях. Показано, что нарушение механизмов пролиферации — одна из главных особенностей опухолевых клеток. А уровень пролиферативной активности определяет агрессивность и злокачественность опухолевого процесса [7].

Целью работы была оценка маркеров апоптоза и пролиферации опухолевой ткани при раке яичника (РЯ) в динамике прогрессирования опухоли.

ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалом для исследования послужили гистологические препараты операционно-биопсийного материала первичной опухоли 83 первичных больных РЯ. По стадиям (ст.) заболевания (FIGO, 1976) больных распределили следующим образом: Iст. была у 4 (4,8%), II — у 6 (7,2%), III — у 40 (48,2%), IV — у

33 (39,8%). В зависимости от гистологической структуры опухоли в исследуемой группе 29 (35%) были отне-

сеныксерозному гистотипу, 23 (28%)— муцинозному, 16 (19%) — эндометриоидному, 13 (16%) — мезонеф-

роидному и 2 (2%) — неклассифицируемому.

Образцы опухолевой ткани фиксировали в нейтральном забуференном формалине с обычной стандартной проводкой и заливкой в парафин. Гистологические препараты окрашивали обычными способамии проводили иммуногистохимические исследования.

При оценке пролиферативной активности использовали моноклональные антитела (МкАТ,

«Novocastra» и «Dako») к антигену ядер пролиферирующих клеток PCNA и к негистонному белку Ki-67, который определяется в ядрах клеток во время поздней G-фазы, S, G2 и M, но не в G0 —фазе клеточного цикла. Пролиферативную активность опухоли оценивали как процент Ki-67+-клеток от общего числа опухолевых клеток. Для оценки индекса проли-

ферации по PCNA высчитывали процент клеток, в ядрах которых выявляли экспрессию PCNA.

В иммуногистохимической оценке экспрессии mtp53 использовали мышиные МкАТ к р53, клон DO-7, IgG2b (M7001 «DakoCytomation») в разведении 1 : 100 при времени экспозиции 60 мин. Критерием положительной реакции считалась окраска 10% и более ядер опухолевых клеток. Bcl-2 выявляли

с помощью МкАТ к Bcl-2, клон Bcl-2/100/D5, IgGi (NCL-bcl-2 «Novocastra») в разведении 1 : 80 при инкубации 60 мин. Положительной считалась реакция при цитоплазматической и мембранной окраске более 10% опухолевых клеток.

Полученные в ходе исследования результаты подвергнуты обработке с использованием непараметрических статистических методов. Значимость различий между группами определяли с использованием H-критерия Крускала — Уоллиса. Силу связи между признаками устанавливали ранговой корреляцией Спирмена.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

В результате проведенных исследований было установлено, что на I клинической стадии заболевания количество Ki-67+-клеток невелико и составляет порядка 5,4 ± 0,63%(таблица). Расположение этих клеток не имеет выраженных закономерностей. Ki-67+-клетки располагаются разрозненно и, как правило, единичны. Однако имеется устойчивая тенденция к увеличению таких клеток в мелких железах. В группе РЯ II ст. указанные тенденции сохранялись. При прогрессировании неоплазмы (РЯ III ст.) выявляли тенденцию к усилению экспрессии Ki-67 (см. таблицу).

Таблица Средние значения индексов пролиферации у больных РЯ

на различных клинических стадиях заболевания (М ± m)

Стадия заболевания

(по FIGO)

Индекс пролиферации
Ki-67PCNA
I (n = 4)5,4 ± 0,6322,8 ± 4,03
II (n = 6)10,2 ± 0,66*27,0 ± 5,76*
III (n = 40)47,0 ± 4,12*69,9 ± 12,99*
IV (n = 33)45,5 ± 4,1282,8 ± 11,48

*Различие с данными на предыдущей клинической стадии статистически значимо (p = 0,0001).

Исследование РЯ IV ст. показало сохранение высокой пролиферативной активности: экспрессия Ki-67 в ряде случаев достигала 58% (рис. 1).

Рис. 1. Высокое содержание Ki-67+-клеток. Ув. х 150

Данные литературы относительно уровня экспрессии Ki-67 при РЯ достаточно разноречивы [18]. При этом установлено, что индекс Ki-67 неодинаков при разных гистологических формах РЯ и коррелирует со степенью дифференцировки опухоли при серозном РЯ [8].

С.В. Петров и соавторы [10] указывают, что при иммуногистохимической оценке пролиферативной активности неоплазмы при РЯ реакция на антиген ядер пролиферирующих клеток PCNA выявляется в виде диффузной и/или зернистой окраски ядер раковых клеток. В тканевых образцах PCNA наиболее часто отмечают в папиллярных новообразованиях, в мелких железах и участках инвазивного роста (рис. 2).

Рис. 2. Высокое содержание PCNA+-клеток в железах эндометриоидного РЯ. Ув. х 100

На I и II клинических стадиях заболевания уровень PCNA демонстрирует значительные колебания от 18 до 32%.

В отдельных случаях вообще не выявляли PCNA- положительных клеток. При прогрессировании новообразования (III–IV ст.) количество PCNA- положительных клеток значительно возрастает (см. таблицу), достигая в ряде случаев 100% (рис. 3).

 

Рис. 3. Экспрессия PCNA в 100% клеток РЯ IV ст. Ув. х 100

Таким образом установлено, что пролиферативная активность клеток овариального рака неодинакова на различных клинических стадиях заболевания. В группе больных РЯ на III клинической стадии показатели экспрессии PCNA и Ki-67 достоверно и существенно (р = 0,0001) превышали таковые в группе на I–II клинических стадиях и продолжали возрастать на IV клинической стадии заболевания. Это позволяет утверждать, что при прогрессировании РЯ появляются клоны клеток с высокой пролиферативной активностью.

р53 — полифункциональный белок, основная функция которого реализуется в ядре. Ген р53 постоянно транскрибируется и транслируется, однако сам белок быстро деградирует в протеосомах и в клетках большинства тканей находится на пороге детекции [13]. Мутантный тип mt p53 — долгоживущий протеин, его период полураспада — до 24 ч. Считается, что иммуногистохимическая положительная реакция полностью зависит главным образом от наличия мутантного типа mt 53 [11]. Мутантная форма белка р53 уже не выполняет своих функций и деление клеток ставится неуправляемым процессом [12]. Полагают, что мутации р53 могут как инициировать канцерогенез (синдром Ли — Фраумени) или определять его начальные этапы, так и возникать в процессе роста опухоли, обеспечивая ее новые агрессивные свойства [3]. Мутантный р53 определяется при многих злокачественных образованиях, таких как опухоли легкого (70%), молочной железы (20%), желудка (60%) [21]. В злокачественных эпителиальных опухолях яичника экспрессия р53 может достигать 80% [17, 22].

Результаты проведенного нами исследования по оценке экспрессии антигена р53 атипическими эпителиальными клетками при прогрессировании РЯ представлены на рис. 4. Установлено, что при прогрессировании РЯ увеличивается количество атипических эпителиальных клеток опухоли, экспрессирующих р53. При этом достоверность различий между группами статистически значимая (р= 0,0001) и корреляция со стадией положительная

высокая (r = 0,6092). Полученные результаты позволяют предполагать, что в процессе прогрессирования первичной опухоли либо нарастают мутации гена р53, либо имеет место отбор р53+ опухолевых клеток, обеспечивающих более агрессивное течение. Наряду с р53 наиболее последовательно изучается в апоптозе роль гена bcl-2. В свою очередь белок р53 снижает активность Bcl-2, что, возможно, запускает апоптоз в клетках с поврежденной ДНК. Установлено, что Bcl-2 подавляет Fas-зависимый апоптоз [2]. Изучены механизмы, благодаря которым Bcl-2 реализует свою антиапоптотическую функцию [15]. Данные относительно уровня экспрессии белка Bcl-2 и возможностей использования его в качестве прогностического фактора у больных с солидными опухолями достаточно противоречивы [1].

 

Рис. 4. Содержание атипических эпителиальных клеток яичника, экспрессирующих р53, при прогрессировании РЯ

Результаты проведенного нами исследования по оценке экспрессии антигена Bcl-2 атипическими эпителиальными клетками при прогрессировании РЯ представлены на рис. 5.

 

Рис. 5. Содержание атипических эпителиальных клеток яичника, экспрессирующих Bcl-2, при прогрессировании РЯ

Показано, что при прогрессировании РЯ количество клеток опухоли, экспрессирующих Bcl-2, увеличивается. Достоверность различий между стадиями статистически значимая (р = 0,0001), и корреляция со стадией положительная высокая (r = 0,6255).

Для опухолевых клеток характерны генетические изменения, ведущие к ослаблению различных путей апоптоза, в частности ингибирование проницаемости митохондриальной мембраны для цитохрома С и AIF вследствие изменения экспрессии белков семейств Bcl-2. Для клеток РЯ показано подавление аутофагии — другого способа программированной гибели клеток, связанного с лизосомальной деградацией белков [5]. Считается, что гиперэкспрессия

Bcl-2 приводит к неопластическому процессу. В то же время показано, что низкий уровень этого белка коррелирует с плохим прогнозом при раке молочной железы [23] и его гиперэкспрессия является благоприятным прогностическим признаком при РЯ [6]. Существует также мнение, что экспрессия Bcl-2 не всегда блокирует апоптоз [14]. Вероятно, в разных типах опухолей проявляется разная роль Bcl-2.

Таким образом, на основании выше изложенного можно предполагать, что в процессе прогрессирования РЯ в первичном опухолевом узле, возможно, имеет место отбор р53+ неопластических клеток, характеризующихся высокой пролиферативной активностью и гиперэкспрессией онкопротеина Bcl-2.

Поскольку изученные маркеры пролиферации и апоптоза имеют непосредственное отношение к радиои химиочувствительности неоплазмы [2], полученные результаты могут быть использованы при выборе оптимальных схем лечения и оценке прогноза РЯ на различных клинических стадиях заболевания.

ЛИТЕРАТУРА

  1. Абраменко ИВ, Фильченков АА. Оценка параметров апоптоза в диагностике онкологических заболеваний, их прогнозе и оптимизации схем терапии. Вопр онкол 2003; 49: 21–30.
  2. Акимов АА, Иванов СД, Хансон КП. Апоптоз и лучевая терапия злокачественных новообразований. Вопр онкол 2003; 49: 261–9.
  3. Копнин БП. Мишени действия онкогенов и опухолевых супрессоров: ключ к пониманию базовых механизмов канцерогенеза. Биохимия 2000; 65: 5–33.
  4. Копнин БП. Опухолевые супрессоры и мутаторные гены. В кн: Канцерогенез. / Под ред ДГ Заридзе / Москва: Медицина, 2004: 125–56.
  5. Копнин БП. Современные представления о механизмах злокачественного роста. В: Материалы Х Российского онкологического конгресса. Москва, 2006: 99–102.
  6. Мильчаков ДЕ. Клинико-морфологическая характеристика серозного рака яичников у женщин (на примере Кировской обл). [Автореф дис … канд мед наук]. СанктПетербург, 2007. 19 с.
  7. Пожарисский КМ, Леенман ЕН. Значение иммуногистохимических методик для определения характера лечения и прогноза опухолевых заболеваний Арх патол 2000; (5): 3–11.
  8. Полушкина ИН. Биомолекулярные маркеры как факторы прогноза при серозном раке яичников III–IV стадии. [Автореф дис … канд мед наук]. Москва, 2002. 39 с.
  9. Райхлин НТ, Райхлин АН. Регуляция и проявление апоптоза в физиологических условиях и в опухолях. Вопр онкол 2002; 48: 159–71.
  10. Руководство по иммуногистохимической диагностике опухолей человека. / Под ред СВ Петрова, НТ Райхлиной / Казань: Титул, 2004. 451 с.
  11. Статистика злокачественных новообразований в России и странах СНГ в 2004 г. Под ред МИ Давыдова, ЕМ Аксель. Вестник РОНЦ им ИН Блохина, 2006; 17: 97.
  12. Cloven NG, Kyshtoobayeva A, Burger RA, et al. In vitro chemoresistance and biomarker profiles are unique for histologic subtypes of epithelial ovarian cancer. Gynecol Oncol 2004; 92: 160–6.
  13. Ichihara A, Tanaka K. Roles of proteasomes in cell growth. Mol Biol Rep 1995; 21: 49–52.
  14. Kuwashima Y, Kobayashi Y, Kawarai A, et al. Expression of bcl-2 and apoptotic DNA fragmentation in human endometrial adenocarcinoma cells. Anticancer Res 1996; 16: 3221–4.
  15. Mitselou A, Ioachim E, Kitsou E, et al. Immunohistochemical study of apoptosis — related bcl-2 protein and its correlation with proliferation indices (Ki-67, PCNA), tumor suppression genes (p53, pRb), the oncogene c-erb-B2, sex steroid hormone receptors and other clinico-pathological features, in normal, hyperplastic and neoplastic endometrium. In vivo 2003; 17: 469–78.
  16. Parkin DM, Pisani P, Ferlay J. Global cancer statistics. CA Cancer J Clin 1999; 49: 33–64.
  17. Pieretti M, Hopenhayn-Rich C, Khattar NH, et al. Heterogeneity of ovarian cancer: relationships among histological group, stage of disease, tumor markers, patient characteristics, and survival. Cancer Invest 2002; 20: 11–23.
  18. Reitmaier M, Rudlowski C, Biesterfeld S, et al. Comparative studies on the biological significance of the marker for proliferation Ki-67-Antigen and PSNA in primary ovarian carcinoma. Zentralbl Gynacol 2000; 122: 361–7.
  19. Schmitt СA, Love SW. Apoptosis and therapy. G Path 1999; 187: 127–37.
  20. Soussi T. p53 Antibodies in the sera of patients with various types of cancer: a review. Cancer Res 2000; 60: 1777–88.
  21. Soussi T, Dehouche K, Béroud C. p53 website and analysis of p53 gene mutations in human cancer: forging a link between epidemiology and carcinogenesis. Hum Mutat 2000; 15: 105–13.
  22. Terada K, Mattson D, Goo D, Shimizu D. DNA aneuploidy is associated with increased mortality for stage I endometrial cancer. Gynecol Oncol 2004; 95: 483–7.
  23. Zhang GJ, Kimijima I, Abe R, et al. Apoptotic index correlates to bcl-2 and p53 protein expression, histological grade and prognosis in invasive breast cancers. Anticancer Res 1998;18: 1989–98.

Цитологический метод в диагностике опухолей и опухолеподобных процессов

Цитопатология, клиническая или диагностическая цитология, изучает клеточный состав патологических процессов. В качестве отдельной медицинской специальности официально признана в 1941 г. после работ Папаниколау Г. и Траута Н. К чести нашей страны разработка цитологического метода диагностики начата в 1938 г. в клинико-диагностической лаборатории Московского научно-исследовательского онкологического института им. П.А. Герцена. В 1941 г. профессор Н.Н. Шиллер-Волкова на сессии института доложила о первых результатах по исследованию выделений из влагалища, мокроты и пунктатов. В развитии цитологии можно выделить три основных этапа: эксфолиативная, в основном гинекологическая цитопатология; аспирационная цитология, бурный расцвет которой начинается с 80-х годов и связан с внедрением ультразвуковой диагностики, и современный этап развития определяется применением иммуноцитохимических и молекулярных методов исследования, а также автоматизированного скрининга в гинекологической цитологии.

Цитологический метод технически прост, быстр, сравнительно дешев, малотравматичен. Однако «легкость» цитологического метода обманчива, так как цитологическое исследование должно заканчиваться формулировкой заключения, основываясь на котором разрабатывается тактика лечения.

По способу получения материала цитологию можно подразделить на дооперационную (эксфолиативную, абразивную, аспирационную) и интраоперационную. Эксфолиативная цитология включает в себя исследование вагинальных мазков, мокроты, мочи, плевральной, перитонеальной, перикардиальной, цереброспинальной, синовиальной жидкости и т.д. Этот раздел цитологии отличается простотой техники получения большого количества различного типа клеток, в том числе воспалительного ряда. Клеточный материал может быть не очень хорошо сохранен. Для получения информативного материала с поверхности патологического очага удаляют гноевидные массы, корочки, некротический налет. Если полученный материал представляет жидкость, то в нее добавляется цитрат натрия, чтобы жидкость не свернулась.

Абразивная цитология получает материал из определенного участка внутренних органов, в том числе исследуются субэпителиальные поражения с помощью фиброоптических инструментов. При таком взятии материала клетки хорошо сохраняются, и препараты легко интерпретировать. Материал получают из шейки матки, вагины, эндометрия, респираторного, желудочно-кишечного, мочеполового тракта.

Тонкоигольная биопсия в настоящее время позволяет получить материал практически из любого органа. Метод постоянно совершенствуется и дает оптимальные результаты, что делает его в плане диагностики высокоэффективным и экономичным.

Взятый для цитологического исследования материал помещают на край предметного стекла и другим предметным или покровным стеклом равномерно, сильно не надавливая, тонким слоем распределяют по всей поверхности препарата.

В последние годы помимо рутинных цитологических мазков для получения качественных монослойных цитологических препаратов используется жидкостная система: пунктаты вносятся в специальную среду накопления, после чего центрифугируются в режиме 1000 оборотов в течение 5 минут при среднем ускорении на центрифуге (Суtospin-3, Суtospin-4). Применение методики жидкостной цитологии имеет ряд преимуществ: обеспечивает сохранность клеточных структур, уменьшает фон, клетки сосредотачиваются в одном месте – «окошке», что сокращает время просмотра препарата и значительно экономит дорогие сыворотки при проведении иммуноцитохимического исследова-

ния. Для создания архива и возможности последующего исследования материала используется методика Cell-block, при которой получаются препараты, занимающие промежуточное положение между цитологическими и гистологическими.

Влажная фиксация препарата в спирте сразу после взятия мазков применяется при окраске по Папаниколау. В остальных случаях мазки высушивают на воздухе, а затем фиксируют уже в лаборатории. Наиболее распространенный способ фиксации – в равных объемах спирта и эфира (смесь Никифорова). Для иммуноцитохимического исследования применяют фиксацию ацетоном. При окраске мазков используют панхромную окраску азур-эозином по методу Романовского – Гимза в различных модификациях (Лейшмана, Паппенгейма), а также окраска гематоксилином и эозином, особенно при исследовании гинекологического материала используется окраска по Папаниколау. Возможно при рутинном исследовании или специальной окраске выявление бактериальной флоры, в том числе бацилл Коха, лепры, хеликобактера, трихомонад и т.д.

Цитологическая диагностика основана на следующих принципах:

  • Разница клеточного состава в норме и патологии.
  • Оценка не одной отдельно взятой клетки, а совокупности клеток, большое значение придается фону препарата.
  • Цитолог должен иметь патологоанатомический базис.
  • Каждое исследование завершается формулировкой заключения.

Критерии цитологической диагностики злокачественных новообразований составляются из оценки клетки, ядра и ядрышка.

Клетка:

– увеличена в размере, иногда гигантская, редко размер близок к норме, что затрудняет цитологическую диагностику, например, при коллоидном, тубулярном раке, маститоподобном варианте долькового рака молочной железы, фолликулярном раке щитовидной железы, карциноиде, почечноклеточном светлоклеточном раке, высокодифференцированных веретеноклеточных саркомах;

– изменение формы и полиморфизм клеточных элементов;

– нарушение соотношения ядра и цитоплазмы в сторону увеличения доли ядра;

– диссоциация степени зрелости ядра и цитоплазмы, например, молодое ядро в ороговевшей цитоплазме при высокодифференцированном плоскоклеточном раке.

Ядро:

– увеличение размера, полиморфизм, бугристость, неравномерный рисунок хроматина, наиболее постоянный признак – неровность контуров, гиперхромия, фигуры клеточного деления в цитологических препаратах сравнительно редки.

Ядрышко:

– число ядрышек больше, чем в нормальной клетке, ядрышки увеличены в размере, неправильной формы.

Несмотря на присутствие критериев злокачественности у подавляющего большинства клеток, в некоторых клетках рака эти критерии могут отсутствовать или быть выражены в неполном объеме. Необходимо обращать внимание на особенности взаимного расположения клеток, характер межклеточных связей. Заключение формулируют по совокупности признаков при достаточном количестве клеточного материала. Попытка оценить мазок по неадекватно взятому материалу – наиболее частая причина ошибочных заключений.

Основные задачи цитологической диагностики состоят в следующем:

  1. Формулировка заключения до лечения.
  2. Интраоперационная срочная диагностика.
  3. Контроль эффективности лечения.
  4. Оценка важнейших факторов прогноза течения заболевания.

Цитологическое заключение до лечения включает:

  • определение гистогенеза новообразований;
  • установление степени дифференцировки опухолевого процесса;
  • уточнение степени распространенности опухоли;
  • изучение фоновых изменений;
  • определение некоторых факторов прогноза;
  • возможность исследования бактериальной флоры.

Современное цитологическое заключение не только констатирует наличие рака, но и указывает гистологический тип опухоли и степень дифференцировки согласно общепринятым международным классификациям (МКБ-О и ВОЗ).

Критериями достоверности цитологического метода являются результаты сопоставления с плановым гистологическим исследованием. Наибольший процент совпадений цитологического заключения с окончательным гистологическим заключением наблюдается при исследовании образований кожи, молочной, щитовидной железы, при метастатическом поражении лимфатических узлов. Результаты исследования гиперпластических процессов в эндометрии неудовлетворительны (достоверность 30–50%) и заставляют искать пути совершенствования диагностики. Достоверность цитологической диагностики патологии шейки матки составляет 75–90%. 3–24% исследований, в зависимости от локализации и способа получения материала, оказываются неудачными из-за неадекватно полученного, неинформативного материала.

Таблица 1. Достоверность цитологических исследований
опухолей различных локализаций.

Локализация % совпадения цитологического и гистологического диагноза % совпадения по данным литературы % неудавшихся пункций
Легкое 95,5-97 79-98 2,9-3,0
Молочная железа 95,8-97,4 90-96 2,6-8,3
Лимфатические узлы 98,4-98,7 90 1,6-10,7
Кожа 91,2-92,7 90-98 2,4-12,5
Мягкие ткани
(без указания
гистологического
типа опухоли)
90,2-93,8 65-93,4 5-12,3
Желудочно-кишечный тракт 92,3-97,5 73-93,6 2,5-4,4
Щитовидная железа 85,5-93,2 57-94 1,6-4,2
Шейка матки 89,5-93,2 65-90 3,5-4,5
Эндометрий 78,9-84,8 30-90 3,8-15,4
Почка 86,2-89,3 76,4-91,3 7,1-11,5
Экссудаты 95,7-100 1,2-2,7

Уверенное цитологическое заключение о наличии злокачественного новообразования, совпадающее с клиническими симптомами и данными других диагностических исследований, расценивается как морфологическое подтверждение диагноза злокачественной опухоли. Это предъявляет к цитологическому методу высокие требования и заставляет искать пути предупреждения возможных ошибок. По характеру ошибки цитологов можно разделить на две большие группы: ложноотрицательные и ложноположительные. Ложноотрицательные заключения преобладают и приводят к гиподиагностике опухолевого процесса, чаще всего из-за небольшого количества информативного материала в пунктате. Имеются и объективные трудности в оценке изменений, связанные чаще с высокой дифференцировкой опухоли, например, практически невозможно диагностировать фолликулярный рак щитовидной железы с минимальной инвазией, трудно диагностируется тубулярный, маститоподобная форма долькового рака молочной железы.

Гипердиагностика опухолей на нашем материале многие годы не превышает 1%, однако может служить причиной ненужного, а иногда и калечащего лечения. Истинная гипердиагностика, то есть ложное цитологическое заключение о наличии опухоли, объясняется несколькими наиболее типичными причинами.

Выраженная пролиферация клеточных элементов является наиболее частой причиной гипердиагностики рака. Например, пролиферация эпителия протоков и долек молочной железы при фиброаденоме и пролиферирующем аденозе, особенно при укрупнении ядер, наиболее часто приводит к гипердиагностике рака молочной железы. Правильной диагностике помогает анализ ядерных характеристик клеток опухоли: наличие ровных контуров ядра и равномерное распределение хроматина.

Реактивные изменения эпителия служат также нередкой причиной неадекватной цитологической диагностики. Наиболее тяжелые ошибки встречаются при ангиомиолипоме почки, при которой реактивные изменения почечного эпителия с укрупнением и полиморфизмом ядер приводят к ошибочному диагнозу высокодифференцированного почечноклеточного светлоклеточного рака. Диагностике ангиомиолипомы помогает обнаружение сосудистых структур и веретенообразных клеток, экспрессирующих виментин, десмин, НМВ-45.

Хронический аутоиммунный тиреоидит типа Хашимото сопровождается образованием сосочковоподобных структур, к оценке которых необходимо подходить осторожно и помнить, что при этом процессе реактивные изменения эпителия можно ошибочно принять за папиллярный рак щитовидной железы. Для хронических дерматитов, язв характерны атипические реактивные разрастания многослойного плоского эпителия, нередко представляющие непреодолимые трудности в дифференциальной диагностике с высокодифференцированным плоскоклеточным раком. Выраженные дистрофические изменения клеток являются также одной из причин ошибочной цитологической диагностики. Например, выраженная жировая дистрофия гепатоцитов может привести к гипердиагностике метастаза почечноклеточного светлоклеточного рака, особенно при уже состоявшемся диагнозе рака почки.

Большую проблему цитологии представляет дифференциальная диагностика различных степеней диспластических изменений эпителия и внутриэпителиального рака. Присутствие при тяжелой дисплазии полиморфных крупных клеток с большими неправильно округлыми ядрами, иногда с увеличенными ядрышками, двуядерных клеток с тяжистым рисунком хроматина может быть неверно расценено как рак. При диспластических изменениях плоского эпителия необходимо учесть, что большинство клеток сходны с клетками глубоких слоев, крупные атипические клетки находятся в тесной связи с клетками без признаков атипии, имеются клетки стромы. Для объективизации дифференциальной диагностики различных степеней дисплазии и внутриэпителиального рака желательно проведение морфометрии клеток и ядер, что позволяет значительно снизить процент ошибочных заключений.

Нередко причиной гипердиагностики метастатического поражения в лимфатических узлах являются комплексы клеток укрупненного эндотелия и гистиоцитов, образующих эпителиоподобные структуры, а также наличие макрофагов с содержанием бурого пигмента. При затруднениях диагностики помогает иммуноцитохимическое исследование с небольшим набором антител (VIII фактор, цитокератины, ЭМА, НМВ-45), позволяющее подтвердить или отвергнуть наличие метастазов рака или меланомы.

Во избежание ошибок морфологической диагностики большое значение имеет четкое указание на характер проведенного лечения. Например, прием довольно распространенного антибиотика тетрациклина приводит к накоплению в клетках щитовидной железы бурого пигмента и ошибочному диагнозу метастаза меланомы. Прием мерказолила при зобе сопровождается резким полиморфизмом фолликулярного эпителия, что служит причиной цитологической и даже гистологической гипердиагностики фолликулярного рака. Проведение лучевой терапии вызывает выраженные изменения не только опухолевых клеток, но и нормального эпителия: укрупнение, полиморфизм клеток, патологическое ороговение, что является причиной гипердиагностики рака.

Имеются и объективные диагностические проблемы, например, в дифференциальной диагностике между эндометриоидной высокодифференцированной аденокарциномой и атипической гиперплазией эндометрия, себоррейной (базальноклеточной) кератомой и базально-клеточным раком, инфекционным мононуклеозом и болезнью Ходжкина, где достаточно высокий процент ошибочных заключений и требуется дальнейшая разработка цитологических критериев диагностики.

Знание клинической картины, характера проведенного лечения, применение современных методик морфологической диагностики с использованием иммуноцитохимии и морфометрии способствует сведению случаев гипердиагностики к нулю.

Вместе с истинной цитологической гипердиагностикой существует ложная гипердиагностика, когда цитолог дает уверенное заключение о злокачественном процессе, а при гистологическом исследовании опухоли не обнаруживается, то есть фактически имеет место гистологическая гиподиагностика. Пересмотр цитологических препаратов несколькими высококвалифицированными специалистами, повторное взятие биопсии, клиническое течение заболевания в дальнейшем подтверждают результаты цитологического исследования. Больше всего ложной цитологической гипердиагностики относится к исследованию биопсийного материала из бронхов и гортани, а также при исследовании лимфатическиих узлов, когда при цитологическом исследовании выявлялись единичные комплексы анаплазированных клеток, несомненно принадлежащих раку. При приготовлении гистологических препаратов эти комплексы теряются в готовых гистологических препаратах. Реальная потеря немногочисленных опухолевых клеток при приготовлении гистологических препаратов не допускает игнорирования клиницистом данных цитологического исследования и приводит к «золотому» стандарту – совместному цитологическому и гистологическому исследованию биоптата.

Интраоперационная цитологическая диагностика – одно из основных направлений цитологического метода исследования. Во время операции, используя цитологический метод, уточняется характер патологического процесса, степень распространенности с выявлением метастазов в лимфатические узлы, печень и другие органы, производится контроль радикальности выполненной операции с исследованием краев резекции. Роль цитологии возрастает при разработке показаний к расширенным лимфоаденэктомиям и при определении так называемых «сторожевых», или «сигнальных», лимфатических узлов, которых может быть шесть, и применение гистологического метода невозможно из-за длительности исследования. По данным ведущих клиник, ошибка срочного гистологического исследования «сторожевых» лимфатических узлов составляет 25%, поэтому они рекомендуют использовать интраоперационное цитологическое исследование отпечатков с поверхности разрезанного лимфатического узла. По нашим данным, достоверность срочного цитологического исследования по выявлению метастатического поражения лимфатических узлов составляет 97-99%.

Надо отметить, что к срочному морфологическому исследованию могут быть противопоказания. Срочное интраоперационное морфологическое исследование не рекомендуется выполнять при подозрении на внутриэпителиальный рак с ограниченным очагом поражения из-за того, что не останется материала для планового гистологического исследования. Цитологические критерии внутриэпителиального рака только разрабатываются, и цитолог может дать заключение о раке, не указывая, что это Carcinoma in situ. При внутрипротоковых папилломах небольшого размера срочное гистологическое исследование лучше не выполнять, а цитологическое исследование достоверно поможет установить характер процесса.

При срочной морфологической диагностике существенно помогает макроскопическое исследование операционного материала. Опытный морфолог при визуальном исследовании уже может поставить диагноз, но для подтверждения диагноза необходимо микроскопическое исследование. Например, опухолевый узел классической звездчатой формы может быть при трех совершенно разных процессах: при раке, склерозирующем аденозе с центром Семба и липогранулеме. И только микроскопическое исследование позволяет правильно поставить диагноз.

Цитологический метод позволяет в динамике, не травмируя пациента, изучать лечебный патоморфоз при химиолучевой и фотодинамической терапии.

XX столетие названо в медицинских кругах веком цитопатологии. Оценивая возможности цитологического метода, можно сказать, что есть еще возможности его развития в комбинации с другими дисциплинами и методами.

Иммуноцитохимическое исследование нередко является решающим в дифференциальной диагностике новообразований, когда при рутинном исследовании возникают непреодолимые трудности для установления гистогенеза отдельных опухолей, определения источника метастазирования, трактовки первично-множественных поражений.

За последние годы достигнут огромный прогресс в клиническом использовании различных биологических маркеров. В отличие от сывороточных маркеров, клеточные маркеры определяются непосредственно в опухолевых клетках ИЦХ исследованием, в основе которого лежит реакция антиген-антитело. В их числе онкогены, рецепторы эстрогенов и прогестерона, молекулы, опосредующие апоптоз, рецепторы факторов роста и т. д. Все эти показатели позволяют более детально изучить молекулярно-биологические особенности опухолевых клеток, ассоциированные со степенью дифференцировки, способностью к инвазии и метастазированию, чувствительностью к химиотерапии, и, следовательно, с особенностями течения и прогнозом заболевания в каждом конкретном случае.

Специфических маркеров дифференциальной диагностики злокачественных и доброкачественных опухолевых процессов не существует, но на сегодняшний день активно ведутся научные изыскания в решении этой проблемы. Так, равномерное окрашивание герминативных центров лимфоидных фолликулов с использованием антител bcl-2 указывает на фолликулярную лимфосаркому, в то время как негативная реакция свидетельствует о доброкачественном гиперпластическом процессе; реакция с антителами HBME-1 при ИЦХ исследовании опухолей щитовидной железы часто положительная в злокачественных новообразованиях и практически отсутствует при доброкачественных, в дифференциальной диагностике широко применяют галектин-3, экспрессирующийся карциномами щитовидной железы из А-клеток (папиллярный, фолликулярный) с отсутствием экспрессии в фолликулярных аденомах, зобах и нормальной ткани щитовидной железы.

Для установления гистогенеза и дифференциальной диагностики опухолей разработаны и постоянно совершенствуются, схемы C.R.Taylor и R.J. Cote (1994 г.). Разнообразие моноклональных антител, используемых в иммуноцитохимических исследованиях тонкоигольных пунктатов, в каждом конкретном случае позволяет ответить на вопрос, имеет ли данная опухоль эпителиальное происхождение или является саркомой, меланомой, лимфомой. Иммуноцитохимия широко применяется для иммунофенотипирования злокачественных лимфом, без чего, по современным канонам, невозможно начать лечение.

Иммуноцитохимическое исследование помогает в определении источника метастазирования при невыявленном первичном очаге. К сожалению, органоспецифических маркеров не так уж и много. К их числу могут быть отнесены специфический антиген предстательной железы (ПСA), позволяющий идентифицировать метастазы рака простаты более чем в 95% случаев; тиреоглобулин, экспрессирующийся в 92–98% фолликулярного и папиллярного рака щитовидной железы, и кальцитонин, экпрессирующийся в 80% медуллярных раков щитовидной железы В некоторых случаях рак щитовидной железы может экспрессировать и кальцитонин, и тиреоглобулин, что только с помощью иммуноферментной диагностики позволяет диагностировать диморфные А-С-клеточные раки.

Одним из первых показателей, вошедших в практику лечения больных раком молочной железы (РМЖ), и относящихся к категории клеточных маркеров, были рецепторы стероидных гормонов. Рецепторы стероидных гормонов – это белки, специфически и избирательно связывающие соответствующие стероиды после их проникновения в клетку.

По данным ВОЗ (2003 г.), экспрессия рецепторов эстрогенов (РЭ+) и прогестерона (РП+) в инвазивных протоковых раках составляет 70-80%; инвазивный дольковый рак в 70-95% экспрессирует РЭ, в 60-70% -РП, 100% экспрессия РЭ отмечена в инвазивном криброзном, муцинозных опухолях молочной железы. Эдокринная терапия наиболее эффективна у больных с первичными опухолями с высоким уровнем рецепторов стероидов. При метастатических поражениях степень реакции на эндокринную терапию также зависит от наличия РЭ и РП в опухоли: её эффективность составляет около 10–15% при гормонотрицательных опухолях, 27% при опухоли с РЭ+ и РП-, 46% при статусе РЭ- и РП+ и 75% при опухолях, содержащих РЭ+ и РП+. Рецепторположительные опухоли молочной железы имеют более высокую дифференцировку и более благоприятный прогноз.

Необходимо отметить, что рецепторы гормонов в доброкачественных образованиях молочной железы еще мало изучены. Отмечено повышение числа РЭ+ клеток в нормальной ткани молочной железы с увеличением возраста, а также при склерозирующем аденозе, папилломах, фиброаденомах и листовидных опухолях. Коэкспрессия РЭ+/Ki-67+ с разной степенью выраженности и соотношения большей частью выявлялась в патологии, связанной с риском развития РМЖ.

Рецепторы эстрогенов экспрессируются в клетках рака эндометрия, яичников, шейки матки, щитовидной железы, кишечника, нейроэндокринных опухолей, в том числе карциноидов.

Иммуноцитохимическое исследование позволяет на дооперационном этапе установить важнейшие факторы прогноза опухолевого процесса и скоррегировать схемы лечения. Пролиферативная активность многих новообразований оценивается с помощью антител Ki-67 в злокачественных лимфомах, опухолях молочной, предстательной, поджелудочной железы, легких, гипофиза, толстой кишки. Обнаружена связь между значениями индекса пролиферации и степенью гистологической дифференцировки опухоли и клиническим прогнозом при раке эндометрия, яичников, легкого, молочной железы, мочевого пузыря, лимфомах, опухолях нервной системы.

Гиперэкспрессия онкопротеина C-erbB-2(HER2/neu), являющегося рецептором эпидермального фактора роста 2-го типа, придающего клеткам свойство неограниченного деления, служит фактором риска рецидива заболевания для ряда опухолей: рака молочной железы, толстой кишки, лёгкого и др. Экспрессия онкобелка C-erbB-2 при ИГХ исследовании обнаруживается в 15–40% РМЖ. Выявление онкопротеина C-erbB-2, по мнению некоторых авторов, ассоциируется с высокой степенью злокачественности опухоли, отсутствием РЭ и РП, высокой митотической активностью, устойчивостью к химиотерапии и требует назначение герцептина.

Наличие метастазов в лимфатических узлах при опухолевом поражении является главным дискриминирующим прогностическим признаком. С помощью иммуноцитохимического исследования можно выявить единичные циркулирующие кератин-положительные клетки РМЖ в костном мозге и периферической крови. Применение ИЦХ исследования повышает выявляемость микрометастазов в лимфатических узлах на 3,2–24%.

Иммуноцитохимические реакции оцениваются как качественно при уточнении гистогенеза опухоли, наличии метастаза в лимфатическом узле или другом органе, иммунофенотипировании лимфом, так и количественно – при оценке пролиферативной активности, экспрессии рецепторов гормонов в опухоли, онкопротеина С-erbB-2 и т.д. Иммуноцитохимическая реакция может быть ядерной, цитоплазменной и мембранной. Ядерная реакция проявляется интенсивным окрашиванием ядра и бывает при определении РЭ и РП, Ki–67, PCNA, p53 и т.д. Цитоплазменная реакция характеризуется диффузным окрашиванием цитоплазмы или отложением гранул в виде грубых пятен и зерен. Цитоплазменное окрашивание дают хромогранин, синаптофизин, белок S-100, виментин, десмин, тиреоглобулин, кальцитонин, цитокератины, bcl-2 и т.д. Оценка этой реакции требует большой осторожности и контроля, так как фоновое окрашивание цитоплазмы клеток может быть принято за истинную реакцию. Мембранное окрашивание наблюдается при проведении реакции с онкопротеином C-erbB-2 и ЭМА (эпителиальным мембранным антигеном). Окрашивание в таких случаях только цитоплазмы не должно учитываться как экспрессия антигена. Маркер крупноклеточной анаплазированной лимфомы CD-30 может экспрессироваться как в цитоплазме, так и на мембране клетки.

Для количественной оценки экспрессии маркера Мс. Carthy и соавторы разработали систему подсчета Histo score (H.S.). Система подсчета включает интенсивность иммуноцитохимической окраски, оцениваемую по 4-балльной шкале, и долю окрашенных клеток и представляет собой сумму произведений процентов, отражающих долю клеток с различной интенсивностью окраски на балл, соответствующий интенсивности реакции. Интенсивность окраски в баллах: 0 – нет окрашивания, 1 – слабое окрашивание, 2 – умеренное окрашивание, 3 – сильное, 4 – очень сильное окрашивание. Формула подсчета:

Histochemical score = ∑ P(i)×i (гистосчет),

где i – интенсивность окрашивания, выраженная в баллах от 0 – 4,
Р(i) – процент клеток, окрашенных с разной интенсивностью.

Максимальное количество Histo score соответственно должно быть 400. Подсчет проводится в трех когортах по 100 опухолевых клеток в различных полях зрения (объектив х 40).

В практической работе допустимо использование полуколичественной оценки. Реакция считается отрицательной при полном отсутствии или экспрессии антигена менее 5%–10% опухолевых клеток, слабоположительной – от 5%–10% до 24% клеток, умеренно положительной – в 25%–75%, выраженной – более чем в 75% клеток. При оценке иммуноферментной реакции принимают во внимание интенсивность и полноту окрашивания цитолеммы клеток в центре опухолевого очага. Так, яркая, мембранная, беспрерывная по контуру клетки реакция обозначает выраженную экспрессию белка С-erbB-2 (+++), что в 95% случаев подтверждается амплификацией гена С-erbB-2, выявляемой с помощью FISH (флуоресцентной гибридизацией in situ).

Сопоставляя данные иммуноцитохимических исследований различных опухолей с целью уточнения гистогенетической принадлежности и результатов послеоперационных морфологических заключений, получены следующие результаты: 89% совпадений при анализе опухолей щитовидной железы, 83% при уточнении гистогенеза первичной опухоли и метастазах в лимфатических узлах, 89% – при опухолях мягких тканей и кожи и 100% – при исследовании биологических жидкостей. При определении гормонального статуса РМЖ процент совпадения ИЦХ и ИГХ исследований составляет 88,3%, при исследовании пролиферативной активности – 83%, при определении онкопротеина C-erbB-2 – 93,2%.

При сравнении возможностей ИЦХ исследования при выполнении пункционной биопсии и ИГХ исследования при трепанобиопсии преимущества ИЦХ, на наш взгляд, несомненны. Пункционная биопсия – более простая процедура, не сопровождается такими осложнениями, как воспаление, кровотечение, и позволяет получить полноценный клеточный материал. При неудачной пункции и попадании в некроз, строму опухоли, окружающие ткани можно практически безболезненно повторить процедуру. Кроме того, отсутствует потеря и маскировка антигенов при проводке и депарафинизации материала с использованием агрессивных химических реагентов.

Использование иммуноцитохимического исследования позволяет расширить возможности морфологических методов и на дооперационном этапе уточнить гистогенез, диагностировать первично-множественные поражения, степень распространения и оценить некоторые показатели прогноза и чувствительность опухоли к химиогормонотерапии.

На современном этапе развития в цитологии используются методы молекулярной и генной диагностики: гибридизация in situ, Southern Blotting, Nothern Blooting, Western Blotting, DNK Microarray и т.д) В научной и практической работе цитологи применяют проточную цитофотометрию.

Одним из путей совершенствования цитологического метода исследования является применение морфометрии, что позволяет получать объективные количественные параметры. Например, при обработке на компьютере выделены наиболее информативные морфометрические признаки, относящиеся к параметрам ядра с использованием основных диагностических морфометрических признаков: площадь, периметр, оптической плотности, коэффициент поляризации ядер, числа ядрышек, их площади и периметра. Разработаны объективные морфометрические признаки различных степеней дисплазии при дисгормонально-гиперпластических процессах молочной железы, шейки матки, что уменьшило долю субъективизма в определении различных степеней дисплазии.

Развиваются новые методы микроскопии: фазово-контрастная, флюоресцентная, конфокальная и т.д. Создание компьютерных систем обучения, развитие метода телеконсультации также предъявляют новые требования и, несомненно, будут способствовать развитию и совершенствованию цитологического метода диагностики.

Волченко Надежда Николаевна
д.м.н., профессор, руководитель отделения
онкоцитологии МНИОИ им.П.А.Герцена

Состояние пролиферации и апоптоза при доброкачественных заболеваниях шейки матки Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

субстратом для синтеза коллагена, соединительной ткани и стромы эндометриоидных гетеротопий. Эти же эффекты приводят и к развитию спаечного процесса, сопровождающего НГЭ. Очевидно, что обнаруженный высокий ангиогенный потенциал у пациенток с НГЭ как в сыворотке крови, так и в ПЖ является тем неблагоприятным фоном, на котором прогрессирует бесплодие у данных больных. В связи с этим использование препаратов, снижающих ангиогенный потенциал, будет патогенетически обоснованным и целесообразным.

Литература

1. Адамян Л.В., Кулаков В.И. Эндометриозы. М., 1998.

2. Barlow D.H., Fernandez-Shaw. // Endometriosis. Current Understanding and Management. London, 1995. P. 75-96.

3. Healy D.L. et al. // Hum Reproduction Apdate. 1998. Vol. 4. P. 736-740.

4. Sharkey A.M. et al. // J. Clin. Endocrinol. Matabol. 2000. Vol. 85. P. 402-409.

51 patients with the non-neoplastic endocervical glandular lesions

tivity of the epithelium cells increases the apoptosis decreases.

Диагностика и лечение доброкачественных заболеваний шейки матки в течение 70 лет является актуальной проблемой гинекологии, поскольку именно на фоне доброкачественных заболеваний возможно развитие злокачественного процесса [1].

Целью нашей работы является изучение состояния апоптоза и пролиферации в слизистой оболочке шейки матки (СО ШМ) у женщин с доброкачественными заболеваниями, такими как плоские кондиломы (ПК), эндоцервикозы, цервициты.

Гистологические и иммуногистохимические исследования биоптатов слизистой оболочки шейки матки проведены в 51 случае от женщин, у которых было обнаружено наличие фоновых процессов.

Для иммуногистохимического исследования последующие серийные срезы обрабатывались по стрептавидин-биотиновому пероксидазному методу [2]. Срезы инкубировались с антителами к антигену ядер пролиферирующих клеток — РСМА, к антигену ядер пролиферирующих клеток Ki-67 и антигену ингибитора апоптоза Bcl-2 («Дако», США). При исследовании биоптатов слизистой оболочки шейки матки во всех случаях определены участки многослойного плоского эпителия (МПЭ) с морфологическими признаками папиломовирусной инфекции (ПВИ).

Параллельное изучение нескольких биоптатов от каждой пациентки и серийных срезов этих биоптатов, состоящих из МПЭ и собственной (соединительнотканной) пластинки слизистой оболочки, показало значительную вариабельность толщины МПЭ, так как в каждом отдельном случае определялись участки неутолщенного и утолщенного эпителия.

5. Smith S.K. // Modem Approaches to Endometriosis. London, 1991. P. 57-77.

6. Yung Z.W.I. et al. // American Journal of Pathology. 1996. Vol. 149. P. 1617-1626.

7. Oosterlynck D.J. et al. // Obstet & Gynecology. 1994. Vol. 83 (2). P. 287-292.

8. Harada T. et al. // Gynecol. Obstet. Invest. 1999. Vol. 47. Suppl. 1. P. 34-39.

9. Dmowski W.P., GebelH., Braun D.P. // Hum Reprod. Update 1998. № 4. P. 696-701.

10. McLaren J., Prentice A., Charnock-Jones D.S. // J. Clin. Invest. 1996. Vol. 98. P. 482-489.

11. Barcz E., Kaminski P., Marianowski L. // Ginecol. Pol. 2000. Vol. 71 (9). P. 993-1000.

12. Jones R.K. Bulmer J.N., Searle R.F. // Hum. Reprod. 1995. Vol. 10. P. 3272-3279.

13. Bohtiyar M.O. et al. // Hum. Reprod. 1998. Vol. 13. P. 34923495.

14. Pellicer A. et al. // Fertil. Steril. 1998. Vol. 70. P. 425-431.

15. Kodyrov M. et al. // J. Lancet. 1998. Vol. 352. P. 1747-1750.

2006 г.

were examined. Following results were obtained: then the proliferative ac-

Промежуточный слой МПЭ (включая 2-3 слоя па-рабазальных клеток) в разных случаях отличается различным соотношением типичных для этого слоя так называемых шиповатых клеток и патологически измененных клеток-койлоцитов.

Патологически измененные клетки — койлоциты, это клетки маркеры ПВИ. В наших исследованиях они выявлялись во всех случаях, во всех слоях и, распределяясь мозаично в разных участках, составляли от 5 до 90 % клеток эпителиального пласта. Однако больше всего их находится в промежуточном слое. Мито-тическая активность низкая. Единичные фигуры митоза встречаются в базальном и парабазальном слое. Следует особо подчеркнуть, что в подавляющем большинстве случаев нарастание количества койлоци-тов обусловливает увеличение толщины ЭП.

Поверхностный слой в одних случаях представлен пластом уплощенных клеток с эозинофильной цитоплазмой с округлыми, нередко крупными, с четким зернистым хроматином ядрами, ориентированными в горизонтальной плоскости. В других случаях поверхностный слой состоит из уплощенных, тесно прилегающих друг к другу клеток-чешуек с четкой цитолем-мой и пикнотизированным ядром. Такие участки па-ракератоза имели различную выраженность и протяженность, но присутствовали в большинстве случаев.

Граница с подлежащей соединительной тканью проходит по прямой линии, но изредка деформируется с формированием одиночных сосочков соединительной ткани, врастающих в эпителий (ЭП) вместе с сосудами капиллярного типа. Соединительной ткани вокруг таких капилляров очень мало, что обусловли-

Ростовский научно-исследовательский институт акушерства и педиатрии 25 сентября

УДК 618.146-007.17-089

СОСТОЯНИЕ ПРОЛИФЕРАЦИИ И АПОПТОЗА ПРИ ДОБРОКАЧЕСТВЕННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ ШЕЙКИ МАТКИ

© 2006 г А.А. Берлим, С.О. Дубровина, В.В. Авруцкая, Н.В. Митрохина

вает формирование на поперечных срезах так называемых сосудисто-эпителиальных розеток (СЭР) [3].

Апоптозно измененные клетки определяются во всех случаях, отличаясь некоторой изоляцией от окружающих эпителиоцитов, пикнотизированным ядром и резко эозинофильной цитоплазмой. При фрагментации таких клеток образуются апоптозные тельца. К апоптозно измененным клеткам относятся эпителио-циты с маргинацией хроматина в виде полулуний или в виде периферического ободка резидуального хроматина по периферии ядра с формированием картины «дна стакана», считающейся маркером вирусной инфекции. При иммуногистохимическом исследовании экспрессия РСМЛ отмечалось в ядрах отдельных клеток базального и, несколько чаще, периваскулярного слоя эпителиоцитов. Количество окрашенных ядер и интенсивность окрашивания были небольшими. Экспрессия Ю-67 отмечалась еще меньшей выраженностью. Экспрессия Вс1-2 также была низкой и определялась в ядрах мозаично разбросанных единичных эпителиоцитов.

Обычная по толщине эпителиальная выстилка СО ШМ очагово постепенно переходит в участок значительного утолщения (429,6 мк) ЭП при соотношении клеток слоев 1:13:9. Такие пролифераты сквамозного эпителия (СЭ) формируют ПК. Для плоских кондилом характерно утолщение ЭП, наличие койлоцитов, ги-перпаракератоза, сосудисто-эпителиальных розеток. Базальный слой ПК представлен клетками цилиндрической формы с овальным гиперхромным ядром с нежноглыбчатым хроматином, 1-2 ядрышками и нередко вакуолизированной цитоплазмой. Промежуточный слой резко утолщен. Содержит, кроме очень небольшого количества типичных для МПЭ шиповатых клеток с округлым ядром, большое количество койло-цитов (до 95 %) с перинуклеарным гало, изюмовид-ным ядром, четко выраженной карио- и цитоплазмой. Одиночные или небольшие скопления клеток отличаются маргинацией хроматина нередко с образованием картин «дно стакана». Фрагментация отдельных ядер приводит к формированию апоптозных тел. Параба-зальный слой имеет хорошо выраженные межклеточные канальцы, в нем чаще встречаются фигуры митоза. Все эти изменения (частичное нарушение анизо-морфности, изменение полярности, размера, формы, окраски ядер) лежат в основе койлоцитарной атипии. Поверхностный слой в ПК, как и промежуточный, всегда утолщен. В нем есть признаки не только гиперкератоза (резко выраженная эозинофилия цитоплазмы, наличие включений кератогиалина, образование клеток-чешуек), но и паракератоза — при сохранении ядер в ороговевших клетках. В плоской кондиломе отмечается резкое увеличение плотности и глубины расположения сосудов. Эти сосуды могут проникать в поверхностный слой ЭП, отделяясь от поверхности слизистой оболочки 3-4 пластами клеток-чешуек. Иногда отмечается параллельная пролиферация эпителиоци-тов и очагов фибробластов в строме, что не исключает эффект присутствия так называемых «факторов роста», так как наличие рецепторов к некоторым из них может встречаться в разных типах клеток [4]. Сосуды, врастая из соединительной ткани в составе соединительнотканных сосочков, прогибают базальную мем-

брану вместе с базальным слоем клеток ЭП. На поперечном срезе такие структуры формируют СЭР. Сосуды в таких розетках всегда капиллярного типа, имеют неправильный извилистый ход, меняющийся диаметр просвета, лежат гнездно «бок о бок» по 2-4 поперечных среза в розетке. Неполноценность сосудов в сосудисто-эпителиальных розетках приводит к их гибели и формированию на их месте лакун, заполненных кровью и пикнотизированными ядрами слущенных эндотелиоцитов. В одних случаях такие лакуны оказываются непроницаемыми для крови, в других — вокруг них наблюдается геморрагическое пропитывание прилежащего эпителия, а при поверхностном расположении их и гибели ограничивающих лакуну эпите-лиоцитов формируется источник контактных кровотечений и эрозий СО ШМ.

При иммуногистохимическом исследовании био-птатов с ПК экспрессия РСМЛ носила более выраженный (по сравнению с неаутолизным фрагментом ЭП) характер и отмечалась в ядрах несколько большего количества базальных, парабазальных и периваску-лярных эпителиоцитов, тогда как эпителиальные клетки, формирующие стенку кровяных лакун, были РСМЛ-негативными. Индекс мечения (ИМ) РСМЛ = = 21 % при значительном разбросе цифровых показателей (от 10 до 60 %). Экспрессия К1-67 отличалась еще меньшей выраженностью (ИМ = 6 %) и отсутствием корреляции с экспрессией РСМЛ. Не было параллелизма в изменении митотического индекса (МИ) и ИМ К1-67, отмечаемого в [5]. Экспрессия Вс1-2 определялась в ядрах единичных мозаично разбросанных эпителиоцитов преимущественно промежуточного слоя ЭП ИМ Вс1-2 = 4,44 %, МИ — 0,93 %«, апоптоз-ный индекс (АИ) = 1,06 %.

Полученные данные свидетельствуют об усилении пролиферативной активности и недостаточной стимуляции апоптоза, что в общем сопровождается увеличением толщины ЭП.

В 26 биотатах этой группы выявлен акантоз, при котором определяется неутолщенный или утолщенный пласт МПЭ с наличием койлоцитов, сосудисто-эпителиальных розеток, гиперпаракератоза (количество и выраженность которых индивидуально различны), но с обязательным наличием участков акантоза, количество, размер и форма которых весьма варьируют. Количество койлоцитов в участках акантоза всегда уменьшено, нередко встречаются фигуры митоза, а сосудисто-эпителиальные розетки отсутствуют. Экспрессия РСМЛ, К1-67 и Вс1-2 в участках акантоза характеризуется значительными вариациями как количества положительно окрашенных ядер, так и интенсивностью их окрашивания. Однако чаще ИМ этих показателей бывает несколько выше в участке аканто-за, что свидетельствует о некотором повышении про-лиферативной активности в участках акантоза.

Истинная эрозия отмечена в 3 случаях и была представлена дефектом ЭП. Дно эрозии выстлано рыхлой волокнистой соединительной тканью с выраженной воспалительной инфильтрацией и полнокровными сосудами. МПЭ в крае эрозии резко истончен и состоит из 2-3 слоев уплощенных эпителиоцитов, а в небольшом отдалении от края эрозии представлен утолщенным ЭП, формирующим ПК с наличием кой —

лоцитов, гиперпаракератоза и сосудисто-эпителиальных розеток (СЭР). Примечательно, что близлежащая сосудистая розетка относится к погибшим и имеет вид лакуны, заполненной кровью. При ПВИ с ПК и с дефектным ангиогенезом периодически формируются лакуны с нарушением трофики, некрозом прилежащих эпителиоцитов и формированием истинных эрозий. ПВИ приводит к развитию острых цервицитов и истинных эрозий. Наличие кровяных лакун как маркеров погибших сосудов приводит к развитию микроэрозии СО ШМ.

Эндоцервикозы диагностированы в 38 случаях, при которых в области эндоцервикса кроме железистых структур выявляется наличие покровного цилиндрического и МПЭ. Граница цилиндрического и МПЭ резко выражены. МПЭ всегда имел признаки ПВИ с формирующимися ПК: койлоцитоз, гипер-паракератоз, СЭР.

Для прогрессирующего эндоцервикоза (22 случаев) характерно наличие участков резервно-клеточной гиперплазии в области железистого эпителия с формированием криброзных структур и новообразованием трубчатых желез. В пролиферирующем эпителии таких желез встречаются фигуры митоза, а ядра отличаются экспрессией РСМЛ. Очаговое слущивание цилиндрического эпителия приводит к формированию микроэрозий слизистой оболочки.

При стационарном эндоцервикозе, выявленном в 6 случаях, поверхность СО ШМ выстлана призматическим и прилежащим к нему по резкой границе МПЭ. Последний несколько утолщен за счет промежуточного слоя, который характеризуется достаточно большим количеством койлоцитов, единичными СЭР и отсутствием лакун.

Заживающий эндоцервикоз отмечен в 3 случаях. Заживление происходило по I типу, когда МПЭ перекрывал с краев поверхность эктоцервикоза, выстланную цилиндрическим эпителием, врастал в устья желез и вызывал отслойку и гибель цилиндрического эпителия. Источником врастающего эпителия является граничащий с цилиндрическим МПЭ. Последний содержит много койлоцитов и утолщен, в основном, за счет промежуточного слоя. В МПЭ увеличивается количество митотически делящихся клеток. Параллельно с утолщением ЭП мозаично повышается коли -чество апоптозноизмененных клеток, или отмечается выраженная очаговая пролиферация сосудов с формированием СЭР. Реакции на ядерные антигены проли-феративной активности в них отрицательные.

В 7 случаях выявлен прогрессирующий, местами заживающий эндоцервикоз, при котором мозаично (иногда в разных кусочках одного случая) распределялись очаги микроэрозий и регенерации. Наличие и плотность распределения формирующихся при дефектном ангиогенезе лакун определяли площадь микроэрозий и истинных эрозий. Параллельно с этим выявлялись участки СЭ с очаговым увеличением толщины ЭП, увеличением количества митотически делящихся и апоптозно измененных клеток и апоптозных тел. Апоптоз выявлялся чаще при отсутствии СЭР в утолщенном ЭП.

При заживающем эндоцервикозе пролиферирую-щие участки МПЭ являются источником клеток, пере-

крывающих участки эктоцервикса, выстланные цилиндрическим эпителием. Из них же формируются и акантотические участки, которые, врастая в устья желез, отслаивают цилиндрический эпителий, обусловливая гибель желез. Множество желез в строме лежат «гнездно», характеризуются разной функциональной активностью. В некоторых — определяются очаги пролиферации резервных клеток с положительной реакцией на PCNA и отрицательный на Вс1-2.

Таким образом, проведенное гистологическое и им-муногистохимическое изучение биоптатов СО ШМ показало, что в 51 биоптатах без дисплазии имелись признаки ПВИ и острого или хронического цервицита в 100 % случаев. Эндоцервикозы обнаружены в 75 (из них заживающих — 18,75 %), наличие акантотических участков — в 50, истинных эрозий — в 6,25 %. Показатели эти не случайны и могут быть связаны патогенетически. При ПВИ с появлением койлоцитов (цитопати-ческое действие вирусов) нарушается клеточный го-меостаз, что приводит к увеличению количества клеток (за счет промежуточного и поверхностного слоя). Нарушение клеточного гомеостаза происходит при некотором увеличении пролиферативной активности эпите-лиоцитов с повышением МИ, экспрессии PCNA и Ki-67 и с недостаточной стимуляцией апоптоза. Увеличение клеточной массы стимулирует в одних участках СО ШМ апоптоз, в других — индуцирует ангиогенез. Подключение апоптоза с повышением апоптозного индекса сдерживает клеточный дисбаланс, что сочетается с меньшей толщиной ЭП. На фоне снижения апоптоза индуцируется ангиогенез для обеспечения трофики утолщенного ЭП. При индуцированном ангиогенезе пролиферация эндотелия и эпителия сопряжены. Это приводит к формированию ПК, когда в утолщенном участке ЭП с гиперпаракератозом, кроме койлоцитов, появляется большое количество СЭР с периваскуляр-ной пролиферацией эпителия. Дефектность сосудов при индуцированном ангиогенезе предопределяет образование кровяных лакун, некроз эпителия, эрозиро-вание СО, лейкопедез и воспалительную инфильтрацию стромы, что вновь стимулирует пролиферативную активность эпителиоцитов и обусловливает переход истинной эрозии в псевдоэрозию. Регенерация псевдоэрозии происходит при участии МПЭ. Однако при наличии койлоцитов (маркеров ПВИ) патологический процесс может повторяться вновь и вновь [6].

Рецидивирующее течение ПВИ включает как субклинические проявления заболевания (койлоцитоз, кондиломатоз, микроэрозирование), так и клинические (острый, в том числе с наличием истинной эрозии, или хронический цервицит, кольпоскопически определяемый эндоцервикоз). В строме СО ШМ лимфогистио-цитарная инфильтрация с наличием плазматических клеток и полиморфно-ядерных лейкоцитов (очагово) или склерозом отражает хронизацию процесса при рецидивирующем течении ПВИ. Это подтверждается работами Meyer, который предложил рассматривать псевдоэрозию как стадию развития истинной эрозии эктоцервикс [7]. Созвучны с этим наблюдения И. А. Петровой о рецидивах псевдоэрозий и частом сочетании при этом псевдоэрозии и истинной эрозии [8].

Таким образом, приведенные гистологические и иммуногистохимические исследования позволили оп-

ределить многообразие морфологических субстратов ПВИ (цервициты, истинные и псевдоэрозии) с акцентом на нарушенный клеточный гомеостаз, в связи с задержкой дифференцировки эпителиоцитов и неадекватностью апоптоза. Это подтверждается морфомет-рическими данными об увеличении толщины ЭП (до 429,6 мк) и изменений послойного соотношения клеток в ЭП (1:13:9).

Иммуногистохимические исследования показали слабо выраженную экспрессию ядерных антигенов пролиферирующих клеток — РСМЛ (ИМ = 21), Кл-67 (ИМ = 6) и белка Вс1-2 — супрессора клеточной смерти (ИМ = 4,44), что в сочетании с МИ = 0,93 % и АИ = = 1,06 % свидетельствуют о повышении пролифера-тивной активности с задержкой дифференцировки и снижении апоптоза. Сдвиг динамического равновесия между пролиферативной активностью и апоптозом в сторону пролиферации представляет фактор риска для увеличения количества соматических мутаций и гене-

тической нестабильности. Указанные обстоятельства требуют обязательного медицинского контроля. Стратегически стимуляция апоптоза в этой группе больных может быть отнесена к онкопрофилактике.

Литература

1. Christensen N.D., Han R., Kreider J.W. Persistent viral infections. Sussex, 2000.

2. Эллиниди В.Н., Максимова Н.А. Практическая иммуно-гистохимия. СПб., 2000.

3. Гамалеева Т.О. Роль ПВИ в патологии шейки матки: Автореф. дис. … канд. мед. наук. Ростов н/Д, 2000.

4. Зайчик А.Ш., Чурилова Л.П. Общая патоморфология. Т. 1. СПб., 2001.

5. Кулаков В.И. и др. Практическая гинекология. М., 1999.

6. Прилепская В.Н., Голубенко А.Е. Поликлиническая гинекология : Клин. лекции. М., 2004.

7. Головин Д.И. Атлас опухолей человека. Л., 1975.

8. Петрова Е.Н. Гистологическая диагностика заболеваний матки. М., 1964.

Ростовский научно-исследовательский институт акушерства и педиатрии 2S сентября 2006 г.

УДК 618.11-006.2-0.36.65-02-08-092

АНАЛИЗ ПУНКТАТОВ КИСТ ЯИЧНИКОВ

© 2006 г. С. О. Дубровина

Concentrations of hormones and cytokines were studied in the contents of ovarian cysts during the primary and recurrent ovarian cysts by the method of immune-enzyme analysis. The level of proliferative processes and apoptosis in the cysts is much more lower than that in the dominant one.

Впервые в литературе сообщения о пункции кис-тозных образований в яичниках появились в 70-е гг. [1]. Большинство кист яичников, подлежащих пункцион-ной склеротерапии, представлены фолликулярными кистами, сформировавшимися на основе нарушения циклического фолликулогенеза [2]. Тем не менее полученное содержимое кисты подвергают обязательному цитологическому исследованию [3]. Несмотря на широкое и длительное использование аспирации кист яичников под контролем УЗИ не только зарубежом, но и в нашей стране, у данного метода лечения остается немало противников в связи с онконастороженностью [4]. Использование онкомаркеров для исключения истинного опухолевого процесса при аспирации содержимого кист неправомочно, так как пункция проводится у женщин детородного возраста, а повышение концентрации маркера СА-125 у этой возрастной группы отмечено при воспалительных заболеваниях, доброкачественных опухолях яичников. Сочетание опухоли яичника с повышенным содержанием маркера СА-125 у женщин детородного возраста не может служить достоверным признаком злокачественного характера опухоли, определение концентрации этого маркера целесообразно только у пациенток старше 50 лет [5].

Поэтому актуальным остается поиск маркеров отсутствия опухолевого процесса в кисте яичника при проведении пункционной склеротерапии для доказательства правомочности использования данной методики в повседневной практике.

Целью исследования явилось определение достоверных маркеров отсутствия опухолевого процесса при проведении пункционной склеротерапии кист

яичников, а также механизма рецидивирования кист при неэффективности пункционной склеротерапии.

Материалы и методы исследования В связи с поставленной целью было предпринято изучение концентрации гормонов (эстрадиола, прогестерона, тестостерона, лютеинизирующего (ЛГ), фолликулостимулирующего (ФСГ), пролактина), ин-терлейкинов 1, 2, 6 и 8, (ИЛ), факторов апоптоза (ан-ти-р53-антител, sFas — растворимой формы гена Fas, его лиганда FasL), ингибина А, факторов роста (сосу-дисто-эндотелиального (СЭФР), основного фактора роста фибробластов (оФРФ) в содержимом кист яичников и крови при первичных и рецидивирующих кистах яичников методом иммуноферментного анализа.

Исследование содержимого пунктата было выполнено у 70 больных с первичными и 18 с рецидивирующими кистами. В контрольной группе из 29 женщин изучался уровень гормонов и цитокинов в фолликулярной жидкости, взятой из доминантного фолликула при выполнении диагностической лапароскопии по поводу бесплодия.

Для определения интерлейкинов, факторов роста методом иммуноферментного анализа в работе были использованы наборы реактивов Cytimmune Sciences inc (США). sFas и анти-р53-антитела определяли с использованием наборов реактивов Bender MedSys-tems Diagnostics (Austria). Уровень ингибина А в сыворотке крови определяли наборами фирмы DSL (США).

Показания к аспирационному дренированию кист яичников были следующие: диаметр образования 3 см и более; наличие болей внизу живота; нарушение менструальной функции; персистенция кисты более

Цитологическое исследование соскобов шейки матки и цервикального канала с описанием по терминологической системе Бетесда (The Bethesda System – TBS)

Метод определения Цитологическое исследование осуществляется согласно «Номенклатуре клинических лабораторных исследований, применяемых в целях диагностики и слежения за состоянием пациентов в учреждениях Российской Федерации», утвержденной приказом Минздрава России от 21.02.2000 г. №64 и «Примерному перечню лабораторных исследований для клинико-диагностической лаборатории лечебно-профилактических учреждений» от 25.12.1997 г. №380.

Исследуемый материал Смотрите в описании

Доступен выезд на дом

Международный метод своевременного распознавания вероятной онкологической патологии матки.

Онкологические заболевания шейки матки являются серьезной проблемой здравоохранения, широко распространены, имеют надежно распознаваемую преклиническую фазу и длительный период развития. Для достоверной верификации диагноза и выбора методов эффективного лечения применяется надежный скрининг-тест – цитологическое исследование мазков, взятых из шейки матки и цервикального канала. 

Цитологический метод исследования является весьма чувствительным в диагностике предрака (дисплазий) и начального преклинического рака шейки матки (карциномы in situ, микроинвазивного и скрытого инвазивного рака). Цитологический скрининг позволяет выявить пациенток в преклинической фазе заболевания, использовать щадящие методы лечения, сокращать его сроки, снижать частоту инвалидизации и смертности. Скрининговое цитологическое исследование шейки матки рекомендуется проводить ежегодно всем женщинам от 21 года (или через год от начала половой жизни), независимо от клинических показаний. При наличии клинических изменений частота цитологического исследования определяется врачом-гинекологом. 

Для возникновения и развития многих патологических процессов существенное значение имеет особенность анатомического строения шейки матки и, в частности, состояние и взаимоотношение эпителиальных слоев влагалищной части шейки цервикального канала. Как правило, предраковые изменения, а затем и малигнизация, возникают в месте перехода многослойного плоского эпителия влагалищной порции шейки матки в цилиндрический эпителий цервикального канала (зоне трансформации), расположенного (в фертильном возрасте) в области наружного зева. Под влиянием гормональных факторов, травм, воспалительных процессов, диатермокоагуляции зона трансформации (зона стыка) может значительно варьировать. В период увядания овариально-менструальной функции в связи с процессами атрофии уровень стыка поднимается высоко в цервикальный канал. 

В 95-97% случаев злокачественная трансформация происходит в клетках плоского эпителия, в остальных – в клетках цилиндрического эпителия цервикального канала. 

Основоположником диагностической цитопатологии является Г. Папаниколау (G.N. Papanicolaou), который в 1928 г. описал раковые клетки в мазках из влагалища. Им была разработана широко используемая классификация изменения клеток влагалища и цервикального канала шейки матки. Но в этой классификации не учитываются цитологические изменения, обусловленные вирусом папилломы человека (ВПЧ). Поэтому в настоящее время Всемирная организация здравоохранения рекомендует систему, разработанную в клинике Бетесда (США).

Терминологическая система Бетесда (ТБС, 2001 г.)

разработана для унификации описаний результатов цитологического исследования эпителия шейки матки (с целью представления их в удобной клиницистам форме), с выделением в отдельные группы находок разной клинической значимости и оценкой адекватности исследуемого материала. 

Система Бетесда включает 3 категории мазков: норма, мазки неопределенного значения (ASCUS) и внутриэпителиальные (предраковые) поражения низкой (LSIL) и высокой (HSIL) степеней. 

Согласно ТБС, начальным компонентом интерпретации цервикальных мазков является оценка адекватности образца, так как его качество влияет на чувствительность цитологического метода. ТБС 2001 г. предполагает две категории образцов: «удовлетворительный» и «неудовлетворительный».

Терминология системы Бетесда (пересмотр 2004 г.).

NILM – интраэпителиальные изменения и злокачественные процессы отсутствуют. В эту группу включены цитологические заключения о нормальном состоянии эпителия, а также о наличии различных не неопластических состояний (заболеваний). Уточняют их характер и, по возможности, причину: 

  • атрофические изменения; 
  • наличие клеток железистого эпителия после гистерэктомии; 
  • реактивные изменения, ассоциированные с воспалением, включая типичную регенерацию, лучевую терапию, применение внутриматочных контрацептивов; 
  • кроме того, указывают наличие микроорганизмов:
    • Trichomonas vaginalis;
    • грибов, по морфологическому строению соответствующих Candida spp.;
    • бактерий, по морфологическому строению соответствующих Actinomyces spp.;
    • коккобациллярную микрофлору, характерную для бактериального вагиноза;
    • клеточные изменения, соответствующие поражению Herpes simplex virus.

У женщин 40 лет и старше при отсутствии плоскоклеточных интраэпителиальных изменений указывается также наличие эндометриальных клеток.

ASCUS – клетки плоского эпителия с атипией неясного значения.

ASC-Н – клетки плоского эпителия с атипией неясного значения, не исключающие наличия высокой степени интраэпителиальных изменений.

LSIL – интраэпителиальные изменения плоского эпителия низкой степени, включают поражения, ассоциированные с HPV и CIN I.

НSIL – интраэпителиальные изменения плоского эпителия высокой степени, включают CIN II, CIN III, карциному in situ и случаи, подозрительные на наличие инвазии.

Плоскоклеточная карцинома.

AGC – клетки цервикального (железистого) эпителия с атипией неясного значения.

AGC, favor neoplastic – клетки цервикального (железистого) эпителия, возможно неоплазия. 

Эндоцервикальная аденокарцинома in situ. 

Эндоцервикальная аденокарцинома. 

Эндометриальная аденокарцинома. 

Вторичная аденокарцинома. 

Неклассифицируемая карцинома. 

Другие злокачественные опухоли.

Материал для исследования:

мазок эпителия шейки матки (см. инструкцию по взятию биоматериала). 

Инструкция по взятию материала:

Мазки берутся до бимануального исследования и кольпоскопии. Используемые инструменты должны быть стерильными и сухими, поскольку вода и дезинфицирующие растворы разрушают клеточные элементы. 

При профилактическом осмотре женщин (цитологический скрининг) клеточный материал целесообразно получать с поверхности влагалищной части шейки матки (эктоцервикса) и стенок цервикального канала (эндоцервикса), при наличии патологических изменений шейки матки – прицельно. 

В качестве инструмента для взятия материала из шейки матки при профилактическом осмотре используются модифицированные шпатели типа Эйра или щетки Cervix-Brash, Papette. С диагностической целью материал получают раздельно: шпателями из эктоцервикса, щетками типа Cytobrash из эндоцервикса. 

Полученный биологический материал наносится тонким слоем на предметное стекло и подсушивается на воздухе. Стекло обязательно маркируется с указанием фамилии/кода и места взятия клеточного материала (шейка матки, цервикальный канал). Маркировка на предметном стекле и в направлении на цитологическое исследование должны соответствовать друг другу. 

Обращаем внимание, что у девочек до 16 лет гинекологические анализы берутся только в присутствии родителей. В медицинских офисах не делают соскоб и мазок из цервикального канала беременным женщинам со сроком 22 недели и более, так как эта процедура может вызвать осложнения. В случае необходимости для взятия материала вы можете обратиться к своему лечащему врачу. 

В направлении на цитологическое исследование биологического материала обязательно указывают клинические данные, диагноз, особенности и место получения материала, данные о менструальном цикле. 

Мазок должен быть нанесен тонким слоем на стекло и полностью высушен.

Литература

  • American Cancer Society (ACS), American Society for Colposcopy and Cervical Pathology (ASCCP), and American Society for Clinical Pathology (ASCP). Cervical Cancer Screening Guidelines for Average-Risk Women. – Atlanta, GA 30329-4027 USA. — 2012. — http://www.cdc.gov/cancer/cervical/pdf/guidelines.pdf. 
  • Arbyn M., Anttila A. et al. European guidelines for quality assurance in cervical cancer screening (second edition) // Luxembourg: Office for Official Publications of the European Communities. — 2008. — p.25. 
  • Casper G.R., Ostor A.G., Quinn M.A. A clinicopathologic study of glandular dysplasia of the cervix // Gynec. Oncol. — 1997. — №64(1). — р.166-70. 
  • Cirizano F.D. Management of pre-invasive diseade of the cervix // Semin. Surg. Oncol. — 1999. — №16 (3). — р.222-7. 
  • Ferenczy A., Coutlee F., Franco E., Hankins C. Human papillomavirus and HIV coinfection and the risk of neoplasias of the lower genital tract: a review of recent developments // CMAJ. — 2003. — №169(5). — р.431-4. 
  • Franco E.L., Duarte-Franco E., Ferenczy. Cervical cancer: epidemiology, prevention and the role of human papillomavirus infection // CMAJ. — 2001. — №164(7). — р.1017-25.
  • Kenneth R. Shroyer, Mamatha Chivukula et al. CINtec® p16 Cervical Histology Compendium & Staining Atlas // Roche Diagnostics International Ltd. CH-6343 Rotkreuz.– Switzerland, 2012. — http://www.roche.com/index.htm. 
  • Ostor A.G. Natural history of cervical intraepithelial neoplasia: a critical review // Int. J. Gynecol. Pathol. — 1993. — №12(2). — р.186-  
  • Schwartz S.M., Daling J.R., Shera K.A. et al. Human Papillomavirus and prognosis of invasive cervical cancer: a population-based study // J. Clin. Oncol. — 2001. — №19(7). — р.1906-15.
  • Shlay J.C., Dunn T., Byers T et al. Prediction of cervical intraepithelial Neoplasia grade 2-3 using risk assessment and human papillomavirus testing in women with atypia on Papanicolaou smears // Obstet. Gynecol. — 2000. — №96. — р.410-16. 
  • Solomon D., Davey D., Kurman R. et al. The 2001 Bethesda System. Terminaligy for reporting results of cervical cytology // JAMA. — 2002. — vol.16. — р.2114-2118.
  • World Health Organization (WHO). Comprehensive Cervical Cancer Control. A guide to essential practice. – WHO, Geneva. — 2006. — http://www.who.int/reproductive-health/publications/cervical_cancer_gep/text.pdf.
  • Wright T.C. Jr., Cox J.T., Massad L.S. et al. 2001 Consensus Guidelines for the Management of Women with Cervical Cytological Abnormalities // JAMA. — 2002. — №287(16). — р.2120-9. 
  • Воробьев С.Л., Иванова Т.М. и др. Цитологический скрининг рака шейки матки. – М., 2013.

Патология эндометрия | Гинекология | Направления ЦПС Медика

Патология эндометрия часто встречается среди пациенток с первичным и вторичным бесплодием и является одной из основных причин неудач при ЭКО.

Эндометрий – уникальная ткань женского организма, которая у женщин репродуктивного возраста ежемесячно подвергается регулярным динамическим изменениям и предназначена для осуществления репродуктивной функции. Воздействие инфекционных агентов, травматизация, дисгормональные изменения в организме женщины приводят к патологическим изменениям в эндометрии, вследствие чего нарушается способность эндометрия к имплантации эмбриона и/или вынашиванию беременности.

К патологии эндометрия относятся:

· Полип эндометрия

· Гиперплазия эндометрия

· «Тонкий» эндометрий (гипоплазия эндометрия)

· Внутриматочные синехии (синдром Ашермана)

 

Полип эндометрия — доброкачественное образование, исходящее из основания (базального слоя) эндометрия в виде выроста, имеет основание («ножку»), тело и растет в сторону полости матки. Полип эндометрия наиболее распространенный вид патологии эндометрия, может быть единичным или множественным.

Основной причиной образования полипов – это хронический воспалительный процесс в эндометрии.

Клинические проявления:

— обильные и/или длительные менструации

— ациклические кровянистые выделения из половых путей

— мажущие кровянистые выделения до и после менструации

— кровянистые выделения в пери- и постменопаузе

— невынашивание беременности

— бесплодие

 

Гиперплазия эндометрия – это патологическая диффузная или очаговая пролиферация (утолщение) эндометрия.

Основная причина развития гиперплазии эндометрия – это гормональные нарушения в организме женщины в виде относительного или абсолютного избытка эстрогенов при отсутствии или недостаточном влиянии прогестерона. Наиболее часто к избытку эстрогенов приводят ановуляторные менструальные циклы, ожирение, гормонопродуцирующие опухоли яичников, неправильное использование гормональных препаратов. Однако инфекционно-воспалительные изменения в эндометрии также могут стать причиной гиперплазии эндометрия.

 

Клинические проявления:

— обильные и/или длительные менструации

— ациклические маточные кровотечения

— невынашивание беременности

— бесплодие

 

«Тонкий» эндометрий — «тонким» считается эндометрий, когда его толщина при ультразвуковом исследовании не превышает 7 мм. «Тонкий» эндометрий характеризуется нарушением созревания эндометриальных желез на фоне выраженного обеднения его сосудистой сети.

 

Причины возникновения тонкого эндометрия:

— механическое повреждение эндометрия (хирургические аборты, выскабливания стенок полости матки, внутриматочные контрацептивы, многочисленные хирургические операции на полости матки)

— хронический воспалительный процесс в эндометрии.

— медикаментозное воздействие (ОК, химиотерапия).

— аутоиммунные заболевания.

 

Клинические проявления тонкого эндометрия:

— невынашивание беременности

— бесплодие

 

Внутриматочные синехии (синдром Ашермана) — патологическое состояние, характеризующееся образованием соединительнотканных сращений эндометрия, спаивающие стенки матки и вызывающие ее деформацию. При наличии синехий нормальный эндометрий подвергается атрофической трансформации.

Причины возникновения внутриматочных синехий:

— механическое повреждение эндометрия (хирургические аборты, выскабливания стенок полости матки, внутриматочные контрацептивы, многочисленные хирургические операции на полости матки)

— хронический воспалительный процесс в эндометрии.

Клинические проявления:

— скудные менструации или их полное отсутствие

— бесплодие

— невынашивание беременности

 

Диагностика патологи эндометрия.

Первой линией диагностического поиска для оценки состояния эндометрия является ультразвуковое исследование органов малого таза. Информативность метода зависит от вида патологии эндометрия и возраста женщины. При наличии тонких структурных изменений в эндометрии (мелкие железистые полипы, тонкие синехии…) ультазвуковое исследование может оказаться малоинформативной.

«Золотым стандартом» диагностики и лечения внутриматочной патологии является гистероскопия.

Гистероскопия — визуальное исследование полости матки с помощью оптической системы.

Гистероскоп – диагностический и одновременно хирургический инструмент, состоящий их оптической трубки и каналов для миниатюрных инструментов или проводников энергии.

С помощью гистероскопа врач:

— Осматривает полость матки, оценивает состояние эндометрия и характер внутриматочной патологии.

— Имеет возможность прицельно брать биопсию эндометрия, удалять полипы или измененные участки эндометрия, при минимальной травматизации тканей, используя микроинструменты

— Имеет возможность выполнять внутриматочные операции под контролем зрения с применением электро и лазерной хирургии (рассечение синехий, внутриматочных перегородок, резекция крупных полипов, субмукозных узлов, тотального удаления эндометрия)

Таким образом гистероскопия совмещает в одной процедуре диагностику и хирургическое лечение патологии эндометрия и действует по принципу «вижу и лечу».

Окончательный диагноз, для выбора дальнейшей тактики лечения патологии эндометрия дает гистологическое (и иммуногистохимическое) исследование, полученных при гистероскопии, участков эндометрия.

 

Понимая важность бережного отношения к эндометрию и одновременно владея всеми техниками гистероскопических манипуляций гинекологи-репродуктологи «Центра планирования семьи «Медика» в комлексе лечебных манипуляций используют малотравматичное устранение внутриматочных патологий с последующим восстановлением менструальной функции и фертильности.

бородавки, моллюски, кондиломы, кератомы, папилломы, невусы.

Родинки и другие новообразования кожи: бородавки, моллюски, кондиломы, кератомы, папилломы, невусы.

Родинки и другие новообразования кожи: бородавки, моллюски, кондиломы, кератомы, папилломы, невусы.

Невусы (родинка, невоидная опухоль, родимое пятно, англ. nevus, испан. lunar, итал. neo, segno, voglia, нем. muttermal, naevus, франц. envie, tache de vin, лат. naevus – родимое пятно) – генетически обусловленные образования кожи, разделяющиеся на 2 основные группы:

  1. Ограниченная очаговая дисплазия – порок развития периферических чувствительных нервов, отличается от окружающей кожи цветом и видом поверхности;
  2. Доброкачественное очаговое разрастание меланинобразующих клеток в коже, возникающее в первые годы жизни (невоидная опухоль).

Невусы относятся к новообразованиям кожи.

Новообразование кожи (бластома, опухоль) – избыточное патологическое разрастание дермальной ткани, патологическая их пролиферация, не координированная с функциями органов и систем и продолжающаяся после прекращения действия этиологических факторов. Новообразования кожи различаются:

  • по происхождению: врожденные, приобретенные, пороки развития или опухоли,
  • по течению: доброкачественные, злокачественные, предраки;
  • по этиологии: генетически обусловленные, вирусные, актинические, посттравматические.

Начальный этап развития невуса – пролиферация меланоцитов (пограничная активность). Дальнейшее развитие невуса определяется их дифференцировкой.

Формы невусов: пигментные (меланоцитарные или невоклеточные, лентиго, «монгольское пятно», голубые, диспластические и др.), бородавчатые, сосудистые, придатков кожи (волосяных фолликулов, сальных желез, апокринных и эккринных желез), систематизированные (линейные, обширные). Могут обнаруживаться в момент рождения – врожденные, или появляться в течение жизни – приобретенные. По этиологии, типу клинического течения и трансформации в меланому невусы подразделяются на 4 группы:

  1. Невусы эпидермального меланоцитарного происхождения:
  • Основные типы: пограничный (интраэпидермальный) невус, смешанный (сложный) невус, внутридермальный (интрадермальный) невус.
  • Особые типы: веретеноклеточный или эпителиоидный невус, невус из баллонообразующих клеток, галоневус.
  • Невусы дермального меланоцитарного происхождения: монгольское пятно, невус Ота, невус Ито, простой и клеточный голубые невусы.
  • Невусы смешанного дермального и эпидермального происхождения: комбинированный невус, врожденный невус.
  • Невусы-предшественники меланомы: врожденный, диспластический.
  • Невусы могут быть пигментные, бородавчатые, сосудистые, придатков кожи. Клинические виды меланоцитарных невусов: плоский, узловатый, папилломатозный, полипозный, пилозный, веррукозный, кератотический и др. Меланоопасные невусы – диспластический, врожденный, голубой невус, невус Ота, гигантский пигментный невус, меланоз Дюбрея. Часто родинки напоминают другие образования – папилломы, кератомы, бородавки. Это вирусные образования, которые распространяются по коже контактным путем. Их необходимо удалять. Поставить диагноз и выбрать правильную тактику лечения может только специалист.

    С большинством невусов можно жить всю жизнь, но при этом их категорически нельзя травмировать, натирать, раздражать, подвергать воздействию солнечного излучения. Принимать солнечные ванны следует только до 10 часов утра и после 17 часов. С 12 до 17 часов лучше провести в тени, когда обжигающее излучение особенно сильно. Длительное пребывание на солнце опасно, особенно тем, у кого много невусов. Ультрафиолетовое излучение – это известный провокатор меланомы. Причем бессмысленно закрывать родинки полотенцем или панамой, заклеивать пластырем — меланома не дремлет и под таким прикрытием. Хотите загорать – предварительно удалите невусы. Нужно строго дозировать пребывание на солнце детей. Каждый солнечный ожог, полученный в нежном возрасте, в несколько раз увеличивает риск развития меланомы в зрелости. Американские ученые считают, что излучение в соляриях более опасно, чем естественное солнечное. Загорать в солярии противопоказано при любых новообразованиях на коже. Очень опасны постоянные микротравмы, поэтому родинки, локализованные на местах трения (спина, молочные железы, в области лямок, резинок, на лице), достойны наибольшего внимания. Родинка безобидна до поры до времени. Она — своеобразная атомная бомба, которая в любой момент может «взорваться» и переродиться в меланому. Меланома самая злокачественная опухоль человека, в 95% случаев возникает из невусов, чаще всего из врожденных и диспластических, редко может появиться на гладкой коже спонтанно. Когда говорят «удалил родинку – умер от рака», — это значит, что была уже не родинка, а меланома. Следует обращать внимание на любое изменение родинки – ее окраски, размера, формы, поверхности (исчезновение кожного рисунка или изъязвление), появление зуда, болезненности, кровоточивости, возникновение сателлитов (мелких черных точек вокруг родинки). Эти признаки свидетельствуют об активизации пигментного образования и перерождения его в меланому. При их появлениях нужно срочно обратиться к специалисту.

    В целях профилактики перерождения в рак необходимо регулярное наблюдение за родинками, рекомендуется исключить любое их травмирование и массаж. Своевременное удаление родинки – самая надежная профилактика меланомы. Но решить «удалять или не удалять родинку» может только врач дерматоонколог. Есть невусы, которые удаляются по медицинским показаниям, другие – по косметическим, а есть такие, которые нельзя трогать. Ни в коем случае нельзя самостоятельно воздействовать на родинки различными растворами, мазями, прижиганиями, перевязывать нитками, а также удалять их дома, в салонах красоты, поликлиниках и в других не специализированных медицинских учреждениях. Также нельзя, сначала взять кусочек родинки на биопсию, а затем через какое- то время ее удалить. Невус удаляется только специалистами онкологами или дерматоонкологами (специалистами как в дерматологии, так и онкологии) методом резекции или электрорезекции с одновременным взятием всего удаленного образования на гистологическое исследование. При удалении родинок лазером не предоставляется возможным взять материал на гистологию, что не гарантирует дальнейшей безопасности жизни пациента. Ошибочно мнение, что лазер не оставляет рубцов. Оставляет, причем рубцы после лазерного воздействия убрать невозможно.

    Удаление родинок на открытых частях тела, тем более на лице, должно быть эстетическим, требующим особого навыка и умения от специалиста, и здесь все зависит не столько от аппарата, а в основном от навыков, рук и знаний врача.

    В Центре лечебной косметологии СОКВД специалисты дерматовенерологии-косметологи со специализацией по дерматоонкологии могут квалифицированно проконсультировать по любому новообразованию кожи, избрать и провести правильную тактику лечения. Удаление всех новообразований проводится с обязательным гистологическим исследованием. При этом используются медицинские методы с высоким косметическим эффектом.

    Определение распространения по Merriam-Webster

    pro · lif · er · ел | \ prə-ˈli-fə-rāt \

    распространился; разрастающийся

    непереходный глагол

    1 : для роста за счет быстрого производства новых частей, клеток, почек или потомства

    переходный глагол

    1 : вызвать рост за счет размножения

    2 : вызывать увеличение числа или степени, как если бы за счет размножения

    Определение и значение распространения | Словарь английского языка Коллинза

    Примеры ‘распространение’ в предложении

    распространение

    Эти примеры были выбраны автоматически и могут содержать конфиденциальный контент.Читать далее… Он работал над ограничением распространения ядерного оружия и повышением эффективности правительства.

    Times, Sunday Times (2016)

    Он работал над ограничением распространения ядерного оружия и повышением эффективности правительства.

    Times, Sunday Times (2016)

    Существует реальная опасность распространения ядерного оружия.

    Times, Sunday Times (2007)

    Они помогают бороться с распространением ядерного оружия и способствуют росту и стабильности.

    Times, Sunday Times (2010)

    Он утверждает, что было бы глупо оставлять дыры в средствах ядерного сдерживания, когда распространение ядерного оружия представляет собой растущую опасность.

    Times, Sunday Times (2013)

    Отсюда быстрая эволюция и распространение.

    Times, Sunday Times (2006)

    Опасности распространения ядерного оружия гораздо более серьезны.

    Times, Sunday Times (2010)

    Только по одной экологической проблеме произошло существенное изменение отношения — распространение ядерной энергетики.

    Гренвилл, Дж. А. С. Коллинзская история мира в 20-м веке (1994)

    Я отказываюсь рассматривать распространение мелких партий как конституционный кризис.

    Times, Sunday Times (2015)

    Что он не сделал, так это уменьшил международную потребность принуждения Ирана к его обязательствам по ядерному распространению и региональному миру.

    Times, Sunday Times (2007)

    Подробнее …

    Хотя возражения против заявки варьировались от экономики предприятия до распространения ядерного оружия, значительный упор был сделан на радиационную защиту.

    Times, Sunday Times (2011)

    Это было десятилетие, когда нам снова пришлось беспокоиться о распространении ядерного оружия.

    Times, Sunday Times (2009)

    Опасения по поводу распространения ядерного оружия не ограничиваются Ближним Востоком.

    Times, Sunday Times (2009)

    По тону ее голоса можно подумать, что она говорила о распространении ядерного оружия.

    Times, Sunday Times (2007)

    Наша решительная позиция в отношении распространения всех видов оружия массового уничтожения на Ближнем Востоке и во всем мире хорошо известна.

    Times, Sunday Times (2012)

    Проблема технологии заключается в том, что она слишком податлива для массового производства и, следовательно, не поддается быстрому распространению общей стандартной инфраструктуры.

    Джеффри А. Мур ЖИЗНЬ НА ЛИНИИ НЕИСПРАВНОСТЕЙ, ПЕРЕСМОТРЕННОЕ ИЗДАНИЕ (2002)

    Пролиферация клеток и клеточный цикл

    Определения, отличия


    Определение

    Клеточная пролиферация относится к процессам, которые приводят к увеличению количества клеток.

    Таким образом, это фундаментальный процесс среди живых организмов, необходимый для общего развития (эмбриональное развитие, рост и развитие органов, а также различные физиологические процессы).

    Увеличение количества клеток происходит через последовательность этапов, составляющих митотический цикл, также известный как цикл генерации, клеточный цикл или пролиферативный цикл.

    Учитывая, что пролиферация клеток включает увеличение количества клеток, количество клеток, присутствующих во время этого процесса, измеряется как функция времени.

    Для нормального развития и функционирования органов, тканей и тела требуется надлежащая (или нормальная) пространственно-временная регуляция общей пролиферации клеток.В случае ненормальной регуляции может произойти чрезмерная пролиферация, приводящая к накоплению ненормального количества клеток.

    * Хотя пролиферация клеток важна для нормального роста и развития, стоит отметить, что клетки размножаются только по мере необходимости. По этой причине некоторые соматические клетки в тканях не размножаются до тех пор, пока в этом нет необходимости.


    Механизмы, регулирующие пролиферацию клеток

    В нормальных условиях пролиферация клеток будет происходить через четыре стадии клеточного цикла, включая фазу G1, фазу S, фазу G2 и фазу M.Прежде чем подробно рассматривать эти шаги, важно понять некоторые элементы управления, регулирующие пролиферацию клеток.

    Ряд факторов окружающей среды (внутренняя среда) способствуют и регулируют пролиферацию клеток. Сюда входят, среди прочего, такие факторы, как питательные вещества, уровни температуры, pH и кислород. В свою очередь, эти факторы вносят вклад в механизмы, контролирующие скорость пролиферации клеток.


    Положительный и отрицательный контроль

    У многоклеточных эукариот баланс между положительным и отрицательным контролем регулирует скорость пролиферации клеток.Хорошим примером этого является адгезия клеток. Например, в эпителиальных тканях тесная адгезия клеток отрицательно контролирует пролиферацию (она снижается).

    В случае травмы, которая приводит к потере адгезии, отрицательная адгезия теряется, в то время как активируется положительный контроль. Это способствует пролиферации клеток и, следовательно, заживлению ран. Скорость, с которой это происходит, зависит от факторов, упомянутых выше, а также от ряда других факторов пролиферации, таких как факторы роста, которые имеют тенденцию быть клеточно-специфическими.


    Внутриклеточные органы управления

    Хотя механическая травма может влиять на пролиферацию клеток, существуют также различные типы внутреннего контроля, отвечающие за регулирование этого процесса. В частности, было показано, что это происходит в случаях, когда затрагиваются внутренние клеточные структуры.

    В случае повреждения ДНК данные процессы зависят от стадии клеточного цикла. Хорошим примером этого является повреждение ДНК во время фазы G1.

    Здесь белок, известный как p53, обнаружив несовпадения в ДНК, активирует другой белок (p21), который, в свою очередь, связывается с комплексом CDK-циклин и, следовательно, ингибирует активность циклин-зависимой протеинкиназы.В результате белки-мишени этого фермента не фосфорилируются, что останавливает клеточный цикл.

    Это хороший пример отрицательного внутриклеточного контроля, поскольку он останавливает клеточный цикл и, следовательно, пролиферацию клеток. Однако после репарации ДНК уровень белка p53 падает, позволяя активностям CDK продолжаться и, следовательно, позволяя продолжаться клеточному циклу (положительный внутриклеточный контроль).

    Некоторые другие молекулы и белки, которые действуют как внутриклеточные регуляторы, включают:

    • Цитохром c — участвует в активации инициаторных каспаз
    • Bcl-2 и Bcl-x — играет роль в блокировании высвобождения цитохром с


    Клеточный цикл и пролиферация клеток

    По сути, пролиферация (увеличение числа) клеток происходит посредством деления клетки, когда клетка делится на две равные копии.Здесь факторы роста в данной среде используют различные пути передачи сигналов факторов роста, которые не только влияют / стимулируют рост клеток, но также активируют эти клетки для вступления в клеточный цикл.

    * Помимо активации факторами роста, некоторые клетки также входят в цикл через процесс оплодотворения.

    Кредит: HD-анимация сигнального пути распространения клеток, созданная

    McGraw-Hill Animations


    События клеточного цикла

    Для того, чтобы покоящиеся клетки (G0) или стволовые клетки вступили в процесс клеточного цикла, они сначала должны быть активированы факторами роста.После активации клетки вступают в первый период роста (G1).

    На этом этапе клетка начинает подготовку к синтезу ДНК. Перед точкой ограничения (R), которая является точкой ближе к концу первой фазы роста клеток, различные факторы могут повлиять на процесс, таким образом предотвращая переход клетки в другие фазы клеточного цикла.

    После этой точки ячейка необратимо обязана пройти оставшиеся фазы цикла. Хотя факторы роста играют важную роль в инициировании этого процесса, именно внутренний сигнальный цикл клетки берет на себя ответственность за остальные фазы клеточного цикла.

    · G1-фаза (интерфаза) — это фаза, в которой в клетке синтезируются различные белки для репликации ДНК

    · S-фаза, в которой реплицируются хромосомы, образуя две сестринские хроматиды.

    · G2-фаза — во время этой фазы синтезируются различные типы белков, необходимых для митоза (M-фаза).

    · Стадии клеточного цикла (митоза)

    Митоз (М-фаза) — это тип деления клеток, в результате которого образуются две дочерние клетки.

    Следующие основные стадии митоза:

    * Митоз инициируется циклином B (CDK1)

    · Профаза — На этой стадии митоза центросомы, которые были изначально спарены начинают разделяться, когда хромосомы начинают конденсироваться, чтобы образовать сестринские хроматиды (прикрепленные друг к другу молекулами сцепления центросом). Также на этой стадии начинает распадаться ядерная мембрана.

    · Прометафаза — Во время прометафазы ядерная мембрана, которая начала распадаться на стадии профазы, исчезает, когда волокна веретена начинают собираться. Эти волокна (микротрубочки) увеличивают пространство между полюсами, а также прикрепляют сестринские хроматиды.

    · Метафаза — Во время метафазы микротрубочки начинают разъединять сестринские хроматиды. Однако они не разделяются, пока все хроматиды не окажутся на своих местах.

    · Анафаза — Когда все сестринские хроматиды находятся на своих местах, сигнал, находящийся под влиянием комплекса, стимулирующего анафазу, стимулирует их разделение.

    · Телофаза — На этой стадии хромосомы полностью разделяются и начинают двигаться к противоположным полюсам клетки. Более того, клетка начинает делиться в процессе, известном как цитокинез. Здесь сократительные кольца, известные как актомиозин, расщепляют клетку на две, в конечном итоге производя две дочерние клетки.


    Пролиферация клеток в дифференцировке

    По сравнению с дифференцированными клетками, эмбриональные клетки быстро размножаются. После того, как эти клетки дифференцируются, скорость пролиферации имеет тенденцию к снижению, поскольку некоторые из новых клеток подвергаются только пролиферации, чтобы заменить те, которые были потеряны в результате травмы и т. Д.

    Здесь, однако, стоит отметить, что среди взрослых клетки можно разделить на три основные группы в отношении распространения.

    К ним относятся:

    • Клетки, которые больше не делятся после дифференцировки клеток

    После дифференцировки (среди взрослых) некоторые клетки больше не могут делиться и размножаться. Сюда входят такие клетки, как клетки сердечной мышцы (миоциты) и нейроны. Дифференцировавшись, эти клетки теряют способность делиться даже в случае повреждения, когда некоторые клетки разрушаются. Поэтому они сохраняются в том виде, в каком они есть, в течение всей жизни пациента и никогда не заменяются / не пополняются.

    • Дифференцированные клетки взрослых, которые претерпевают деление / пролиферацию клеток

    Среди взрослых большинство клеток входят в фазу G0 и делятся только при необходимости. К ним относятся такие клетки, как эпителиальные клетки различных внутренних органов, фибробласты кожи и т. Д.

    После травмы фибробласты кожи подвергаются клеточному делению, чтобы произвести новые клетки для восстановления повреждения (закрыть рану / порез).То же самое и с клетками печени, которые имеют тенденцию к размножению, чтобы заменить утраченную ткань.

    У мышей, например, удаление двух третей печени стимулирует быстрое разрастание, которое восстанавливает повреждение, в конечном итоге регенерируя всю печень. Следовательно, эти клетки играют роль в восстановлении различных типов тканей и органов. Однако они делают это только при необходимости.

    Как и в случае с миоцитами, клетки крови и эпителиальные клетки, выстилающие пищеварительный тракт, среди прочего, неспособны делиться с образованием новых клеток.Однако по сравнению с миоцитами эти клетки могут быть заменены особой группой клеток, известной как стволовые клетки.

    Это менее дифференцированные клетки, которые подвергаются делению с образованием новых дочерних клеток (стволовые клетки, которые менее дифференцированы) или клетки, которые могут дифференцироваться, чтобы заменить мертвые или поврежденные клетки.

    По большей части такие клетки, как красные кровяные тельца, имеют короткую продолжительность жизни (от нескольких дней до нескольких месяцев) и нуждаются в замене. Это важные клетки для организма (например,грамм. красные клетки, которые транспортируют кислород к клеткам по всему телу) и поэтому должны продолжать заменяться, когда старые умирают. Однако, поскольку они не могут делиться, стволовые клетки должны продолжать дифференцироваться, чтобы заменить потерянные клетки.

    Также стоит отметить, что как только стволовые клетки дифференцируются, они также теряют способность к делению и должны будут быть заменены вновь дифференцированными клетками из стволовых клеток после их смерти.

    • Клеточная пролиферация и рак

    В нормальных условиях пролиферация клеток регулируется рядом контроллеров (положительных и отрицательных контроллеров), которые активируют и останавливают деление клеток.Следовательно, в таких случаях клетки могут делиться только определенное количество раз (например, заменять клетки, потерянные во время травмы), прежде чем они отмирают или вступают в задержку роста (фаза G0).

    При определенных условиях может происходить аномальная пролиферация, когда клетки продолжают нерегулируемую пролиферацию. Хорошим примером этого является неконтролируемое деление аномальных клеток с образованием массы клеток (опухоли), которые могут быть злокачественными. Здесь аномальные клетки не только продолжают делиться больше, чем должны, но и не умирают.

    * Смерть и уничтожение старых и поврежденных клеток важны, поскольку это предотвращает накопление клеток, которые не могут выполнять свои функции нормальным образом.

    Некоторые из факторов, которые могут вызывать мутации ДНК (и, следовательно, аномальную пролиферацию клеток), включают:

    • Искусственные источники окружающей среды: например, органические химические вещества и пестициды
    • Природные источники, такие как вирусы и некоторые токсины
    • Излучение высокой энергии, такое как гамма-лучи


    В настоящее время используются два механизма для описания того, как опухолевые клетки могут избежать гибели клеток.

    К ним относятся:

    • Способность опухолевых клеток поддерживать теломеры

    Теломеры относятся к последовательности нуклеотидов, расположенных на обоих концах хромосом. Теломеры играют важную роль в предотвращении разрушения хромосом, а также в предотвращении слияния отдельных хромосом с соседними хромосомами.

    В нормальных условиях теломеры становятся короче после каждого цикла клеточного деления и поэтому в некоторых книгах описываются как клеточные часы.

    Когда они полностью истощены, клетка больше не может делиться, поскольку она входит в состояние старения. В то время как некоторые из этих клеток заменяются (дифференцирующимися стволовыми клетками или митотическими клетками), другие больше не заменяются, когда они умирают (например, миоциты).

    Однако для большинства злокачественных клеток (около 90 процентов опухолей человека) высокие количества теломеразы (фермента) продолжают добавлять ДНК к теломерам, что предотвращает их истощение. В результате клетки сохраняют способность продолжать делиться с течением времени.

    • Альтернативное удлинение (ALT)

    В то время как большинство опухолевых клеток человека зависят от высокого уровня фермента теломеразы, который предотвращает истощение теломер, около 10 процентов опухолей, как было показано, полагаются на по механизму, известному как ALT (альтернативное удлинение теломер). В этом механизме концы хромосом пополняются за счет гомологичной рекомбинации.

    Для нормальных клеток этот процесс включает использование соседней ДНК (нормально функционирующей ДНК) в качестве матрицы для восстановления другого фрагмента поврежденной / сломанной ДНК.Однако для опухолевых клеток человека этот механизм служит для пополнения теломер ДНК, предотвращая их истощение (истощение теломер).

    * Согласно исследованию, которое финансировалось Национальным институтом здравоохранения и Институтом Мерье в 2011 году, цепочка ДНК, содержащая большое количество основного цитозина (C-хвост), была обнаружена на кончике теломеры злокачественных клеток и поэтому предполагается, что они вносят вклад в механизм ALT.

    Из-за способности опухолевых клеток продолжать делиться, не умирая, они продолжают увеличиваться в количестве, образуя массы клеток.В отличие от нормальных клеток, эти клетки аномальны и поэтому не выполняют нормальных клеточных функций.

    Это особенно опасно для пациента, поскольку такие клетки могут в конечном итоге отрицательно влиять на другие нормальные клетки и их функции.

    Например, в случае лейкемии костный мозг продолжает производить аномальные белые клетки, которые не функционируют нормально. В результате у пациента могут быть частые инфекции, которые могут быть тяжелыми.

    В медицинских науках клеточные анализы часто используются для открытия лекарств, а также для измерения жизнеспособности и пролиферации клеток.Чтобы определить влияние различных типов молекул (токсичных агентов) на жизнеспособность и пролиферацию клеток, используются цитотоксические анализы.

    Это особенно важно при скрининге лекарств и исследованиях новых типов лекарств для проверки воздействия молекул на клетки (проявляют ли они какие-либо цитотоксические эффекты и т. Д.). По большей части, основная цель таких анализов — изучить жизнеспособность клеток после тестов, а также общее влияние молекул на пролиферацию.

    * Хотя эти анализы важны для скрининга и открытия лекарств, они также используются для определения воздействия различных типов соединений в окружающей среде.

    Хорошим примером анализа цитотоксичности является анализ цитотоксичности LDH WST. В качестве набора для колориметрического анализа этот метод работает путем измерения активности лактатдегидрогеназы, высвобождаемой из поврежденных клеток. Стоит отметить, что лактатдегидрогеназа (ЛДГ) — это фермент, обнаруженный во всех клетках.

    После повреждения клеточной мембраны фермент выделяется в окружающую среду, где его можно измерить. По этой причине его часто используют в качестве биологического маркера в различных исследованиях цитотоксичности.

    В настоящее время доступны различные анализы цитотоксичности для измерения влияния различных молекул на жизнеспособность и пролиферацию клеток.

    Эти методы основаны на различных функциях клеток, включая:

    • Активность ферментов: например, Быстрый анализ пролиферации клеток и анализ цитотоксичности ЛДГ II
    • Клеточная адгезия
    • Обновление нуклеотидов и синтез ДНК: например, Анализ пролиферации клеток BrdU
    • Производство АТФ и производство коферментов: e.грамм. Анализ пролиферации клеток MTS

    Как правило, разные типы химических веществ будут иметь разные цитотоксические эффекты на клетку. В то время как некоторые из этих механизмов приводят к разрушению клеточной мембраны, другие могут действовать, предотвращая синтез важных белков внутри клетки. По этой причине используются различные анализы цитотоксичности для определения специфического воздействия химического вещества на клетки.

    Эти анализы классифицируются следующим образом:

    • Анализы исключения красителей — e.грамм. анализы эритрозина B

    • Флуорометрические анализы — например, amalarBlue

    • Колориметрический анализ — например, Анализ XTT и анализ WST-8

    • Люминометрические анализы — например, Анализы АТФ

    Четыре этапа клеточной сигнализации

    Что такое клеточный метаболизм?

    Вернуться на главную страницу Cell Biology

    Вернуться к клеточной дифференцировке

    Вернуться в отделение клеток

    Вернуться из клеточной пролиферации на главную страницу MicroscopeMaster


    Список литературы

    Арун Кумар.(2018). Зачем изучать жизнеспособность клеток, пролиферацию клеток и цитотоксичность?

    Дэвид Хьюз, Хусейн Мехмет. (2004). Клеточная пролиферация и апоптоз.

    Майкл Дж. Берридж. (2012). Клеточный цикл и пролиферация. Биология клеточной сигнализации.

    Озлем Султан Аслантюрк. (2017). Тесты на цитотоксичность и жизнеспособность клеток in vitro: принципы, преимущества и недостатки.

    Ссылки

    https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK9906/

    https: // www.nature.com/subjects/cell-proliferation

    сообщить об этом объявлении

    Cell Proliferation — обзор

    B Proliferation

    Cell Proliferation — одно из ранних событий активации B-клеток, которое необходимо для увеличения пула активированных антигенами B-клеток и обеспечения достаточного уровня иммунного ответа . Пролиферация В-клеток может запускаться in vitro, несколькими способами. Включение BCR служит первичным стимулом, но, кроме того, несколько костимулирующих молекул или дополнительных рецепторов, таких как CD38, CD40 и CD19, могут напрямую стимулировать пролиферацию B-клеток или снижать порог активации B-клеток антигенами (Barrington et al., 2009 г .; Чен и Росс, 2005, 2007). Агонисты Toll-подобных рецепторов (TLR), такие как LPS и CpG ДНК, являются мультипотентными митогенами, которые стимулируют пролиферацию поликлональных B-клеток через TLR 4 и 9 соответственно (Hoshino et al. , 1999; Krieg et al. , 1995). Недавно было показано, что группа гликолипидных антигенов может стимулировать пролиферацию B-клеток посредством молекулы CD1d, подобной MHC I класса, присутствующей на некоторых B-клетках (Brigl and Brenner, 2010; Lang et al ., 2008), а также миелоидные клетки. Прототипом и наиболее часто изучаемым антигеном CD1d является альфа-галактозилцерамид, липид, извлеченный из морской губки; однако эндогенные гликолипидные антигены клеток млекопитающих также активируют CD1d (Zhou et al. , 2004).

    RA играет различные роли в регулировании активации и дифференцировки В-клеток посредством своего влияния на эти внутренние сигнальные системы. Несколько линий доказательств показали, что регуляция пролиферации B-клеток с помощью RA зависит от природы встречающегося стимула.На физиологическом уровне (около 5-20 нМ) RA ингибировал скорость пролиферации очищенных В-клеток периферической крови человека, стимулированную анти-μ-антителом (Blomhoff et al. , 1992). В наивных В-клетках мышей, стимулированных анти-μ для инициации передачи сигналов BCR и анти-CD38 для лигирования молекулы CD38 на поверхности В-клеток, пролиферация была снижена в популяции в целом, но в группе большего размера, меньше циклически, и со временем появлялось больше дифференцированных В-клеток, и эти клетки экспрессировали больше поверхностного (-ых) Ig, что свидетельствует об усиленном прогрессировании в направлении превращения в секретирующие антитела ПК (Chen and Ross, 2005).В модели in vitro Т-клеточно-зависимой активации B-клеток, RA снижает пролиферацию B-клеток, индуцированную лигированием BCR и CD40 и LPS (Chen and Ross, 2005, 2007). Снижение пролиферации B-клеток под действием RA в условиях различных стимулов предполагает участие общего пути, приводящего к негативной регуляции клеточного цикла и роста, когда B-клетки стимулируются перекрестным связыванием рецепторов, связанных с BCR, и TLR4. Надери и Бломхофф (1999) показали, что снижению пролиферации В-клеток в нормальных периферических В-клетках человека предшествовала остановка клеточного цикла, о чем свидетельствует измененная экспрессия нескольких факторов регуляции клеточного цикла.Отрицательная регуляция пути NF-κB также может способствовать ингибирующему эффекту RA на пролиферацию клеток, поскольку члены семейства NF-κB играют важную роль в контроле развития и пролиферации B-клеток (Chen et al ., 2002; Siebenlist и др. ., 2005). Исследования линии B-лимфоидных клеток в культуре также продемонстрировали, что RA подавляет пролиферацию, блокируя ионизированный кальциевый канал, который опосредует ранний кальциевый ответ после лигирования BCR (Bosma and Sidell, 1988).

    В отличие от ингибирующего эффекта RA на пролиферацию B-клеток, стимулированного лигированием BCR и LPS, как обсуждалось выше, RA увеличивал пролиферацию B-клеток памяти, когда B-клетки стимулировались ДНК CpG, которая индуцирует активацию клеток через TLR9 (Ertesvag и др. , 2007). Повышенная скорость пролиферации В-клеток сопровождалась повышенной секрецией антител. В механистическом исследовании Ertesvag et al . (2007) продемонстрировали, что усиленная пролиферация и дифференцировка с помощью RA соответствует активации пути p38 MAPK, что приводит к фосфорилированию белка ретинобластомы и увеличивает уровень циклина D, факторов, которые стимулируют прогрессирование клеточного цикла.Мы также наблюдали, что RA увеличивает пролиферацию очищенных B-клеток селезенки мышей, стимулированных α-галактозилцерамидом, лигандом рецептора CD1d, что коррелирует с дифференцировкой B-клеток, о чем свидетельствует экспрессия sIgG1 и CD138 (Q. Chen, неопубликовано. data), в то время как RA уменьшал пролиферацию идентичных B-клеток, стимулированных LPS.

    Эти противоположные результаты предполагают, что RA влияет на пролиферацию B-клеток по-разному, в зависимости от субпопуляции B-клеток, а также от стимула.В то время как RA ингибирует пролиферацию зрелых B-клеток, что может способствовать их дифференцировке из активированных B-клеток в направлении PC, RA способствует размножению субпопуляции B-клеток, которые подвергаются дальнейшей дифференцировке (Chen and Ross, 2005), причем оба процесса приводят к промотированию. производства антител. Кроме того, в то время как физиологические уровни RA ингибируют пролиферацию B-клеток, RA в той же концентрации также предотвращает спонтанный апоптоз B-лимфоцитов (Lomo et al. , 1998), что также свидетельствует о том, что, хотя RA ингибирует пролиферацию зрелых B-клеток, он функционирует для поддержания функционального пула B-клеток, необходимого для эффективного ответа памяти.Необходимы дальнейшие исследования, чтобы лучше определить, является ли стадия активации В-клеток per se (наивная или память) или сам стимул, или и то, и другое, что определяет, способствует ли РА или ингибирует цикл и пролиферацию В-клеток.

    разрастаться — определение и значение

  • По мере увеличения количества титулов на , мы рискуем превратиться в нацию всех вождей, а не индейцев.

    Стефани Пирсон и Барбара Харрисон: Должности: что делать, когда ни у кого нет подсказки

  • И по мере того, как эти ярлыки распространяются на , чтобы охватить практически все элементы нетрадиционного детского поведения, наши представления о том, что является нормальным, сужаются.

    Ты лучший родитель, чем ты думаешь!

  • И по мере того, как эти ярлыки распространяются на , чтобы охватить практически все элементы нетрадиционного детского поведения, наши представления о том, что является нормальным, сужаются.

    Ты лучший родитель, чем ты думаешь!

  • Моментальные сделки — сделки, а не инвестиции — могут набирать обороты на нижней стороне в более крутом движении, если маржа требует увеличения до .

    Forbes.com: Новости

  • «По мере повышения качества определения цифровых камер, устройств воспроизведения, таких как , увеличивается число , а использование Интернета для загрузки музыки и видео продолжает расти, все больше файлов накапливается в доме», — сказал вице-президент Parks Курт Шерф.

    Yahoo! Новости: Новости технологий

  • «По мере повышения качества определения цифровых камер, устройств воспроизведения, таких как , увеличивается число , а использование Интернета для загрузки музыки и видео продолжает расти, все больше файлов накапливается в доме», — сказал вице-президент Parks Курт Шерф.

    Yahoo! Новости: Главные новости

  • Ядерное оружие было сокращено, но не отменено, и оно продолжалось. распространялось в новые страны.

    Возвращение

  • И возможности в вашем будущем будут увеличиваться на вместе с вашим процветанием.

    Осветлить

  • Ночью он тусовался в барах, которые разносятся по всему Дубаю, самому большому и яркому из эмиратов, в нескольких минутах езды от его дома в Аджмане.

    Fallout

  • Мы поднялись в этот район с высоким уровнем бедности, где записи с места преступления разрастаются, а количество безработных мужчин задерживается на углах улиц.

    Джон Мерроу: Парадокс? Или просто противоречие?

  • Что означает распространение — определение распространения

    существительное

    СОТРУДНИЧЕСТВО ИЗ КОРПУСА

    ■ ADJECTIVE

    сотовая связь

    ▪ Это может быть результатом действия, опосредованного желчной кислотой, на пролиферацию клеток несколькими возможными путями, как уже обсуждалось.

    ▪ Оба характеризуются фокальным или мультифокальным паттерном распределения, аномальной пролиферацией клеток и генетическим компонентом.

    ▪ И наоборот, диета с низким содержанием клетчатки не привела к изменениям в пролиферации клеток , что могло быть связано с нестабильностью слизистой оболочки.

    слизистая

    ▪ Ранее мы сообщали, как слизистая пролиферация может зависеть от близости к опухоли.

    ▪ Обсуждение Наши результаты согласуются с наблюдениями на человеке, что слизистая оболочка пролиферация уменьшается с увеличением расстояния от илеоцекального клапана до прямой кишки.

    ▪ Были опубликованы ограниченные исследования пролиферации клеток слизистой оболочки желудка человека и опубликован подробный обзор такой работы.

    ▪ Наши данные также согласуются с наблюдениями на людях, что пролиферация слизистой оболочки увеличивается у пациентов с большими аденомами или раком.

    ▪ Изучение слизистой оболочки желудка пролиферации может иметь важные клинические применения.

    атомная

    ▪ Необходимо заставить правительство менее расслабленно взглянуть на международное распространение ядерного оружия .

    ▪ Внезапно ядерных распространение стало первоочередной проблемой в Вашингтоне.

    ▪ Согласно ядерным гарантиям распространения , поставки плутония должны сопровождаться вооруженными судами.

    ▪ Мы должны признать тот факт, что в настоящее время существует больший риск распространения ядерного оружия , чем когда-либо знал мир.

    ▪ Лугар посвятил большую часть своего рекламного времени и выступлений внешней политике, особенно угрозе распространения ядерного оружия .

    ▪ В законодательстве указано, что завод представляет серьезную опасность для окружающей среды и увеличивает риск распространения ядерного оружия .

    ▪ Обсуждения безопасности будущего реактора должны вращаться вокруг двух критических вопросов: ядерных отходов захоронения и ядерного оружия распространения .

    ■ СУЩНОСТЬ

    ячейка

    ▪ Это указывает на то, что стимуляция пролиферации клеток может быть не единственным фактором заживления язвы сукральфатом.

    ▪ Будущие достижения в области технологий могут раскрыть другие, более чувствительные маркеры пролиферации клеток , точность прогнозов которых выше.

    ▪ В некоторых исследованиях было показано, что дополнительный кальций снижает пролиферацию клеток толстой кишки у человека.

    ▪ Считается, что это отражает контроль дефектных клеток пролиферации и отсроченное начало нормальной дифференцировки.

    ▪ Пролиферирующая клетка , иммуногистохимический метод ядерного антигена , хотя многообещающий метод оценки пролиферации клеток еще не полностью стандартизирован.

    ▪ Аналогичный парадокс имеет место во взаимосвязи между пищевыми волокнами, клетками толстой кишки пролиферацией и экспериментальным канцерогенезом.

    ▪ Было доказано, что овсяные отруби увеличивают опухолеобразование, но не влияют на пролиферацию клеток толстой кишки .

    ▪ Было выдвинуто несколько теорий о факторах, вызывающих пролиферацию клеток гладкой мускулатуры .

    ■ ГЛАГОЛ

    свинец

    ▪ Ибо легко придумать другие примеры, где лексический выбор приведет к дальнейшему увеличению на смыслов.

    ▪ Этот привел к распространению на доминирующих на рынке IBM-совместимых машин и к сокращению доли рынка Apple.

    предотвратить

    ▪ CsA предотвращает пролиферацию Т-клеток , блокируя активируемый кальцием путь, ведущий к транскрипции интерлейкина-2.

    ▪ Кроме того, мы будем работать над глобальным запретом на химическое и биологическое оружие и усилением контроля, чтобы предотвратить распространение баллистических ракет.

    ▪ Таким образом, по-прежнему важно поддерживать адекватную защиту от таких диктаторов и предотвратить дальнейшее распространение ядерного оружия.

    ПРИМЕРЫ ИЗ CORPUS

    ▪ Будущие достижения в области технологий могут раскрыть другие, более чувствительные маркеры пролиферации клеток , точность прогнозирования которых выше.

    ▪ Злокачественная меланома кожи вызвана раковой пролиферацией меланоцитов.

    ▪ Ни в представлении Фейерабенда о теории распространения , ни в сдвиге парадигмы Куна нет простой модели прогресса.

    ▪ Сокращение жизненного цикла продукта и быстрое распространение продукта означает, что инвестиции в инновации имеют решающее значение в условиях глобальной конкуренции.

    ▪ Среднее значение пролиферации индексов внутри компартментов было почти одинаковым для обоих анализов.

    ▪ Это указывает на то, что стимуляция пролиферации клеток может быть не единственным фактором заживления язв сукральфатом.

    ▪ Это привело к распространению лидирующих на рынке IBM-совместимых машин и сокращению доли рынка Apple.

    ▪ Где закончится это распространение легкой атлетики?

    Ядерное распространение | военный | Britannica

    Ядерное распространение , распространение ядерного оружия, технологий ядерного оружия или расщепляющегося материала в страны, которые еще не обладают ими. Этот термин также используется для обозначения возможного приобретения ядерного оружия террористическими организациями или другими вооруженными группами.

    Подробнее по этой теме

    ядерная энергетика: распространение

    Уже давно утверждается, что развитие и расширение коммерческой ядерной энергетики привело к распространению ядерного оружия, потому что …

    Во время Второй мировой войны перспектива нацистской Германии, обладающей ядерным оружием, побудила Соединенные Штаты активизировать свои усилия по созданию ядерного оружия.В рамках американской программы, известной как Манхэттенский проект, первая атомная бомба была создана в июле 1945 года. Всего через три недели после первого испытания атомной бомбы в американском штате Нью-Мексико атомная бомба на основе урана была сброшена на Хиросиму, Япония. ; через три дня на Нагасаки была сброшена вторая бомба на основе плутония. Соединенные Штаты оставались единственной ядерной державой до 1949 года, когда Советский Союз испытал свою первую атомную бомбу под кодовым названием First Lightning в отдаленном районе Казахстана. Клаус Фукс, британский физик немецкого происхождения, участвовавший в Манхэттенском проекте, позже был осужден за передачу секретной информации о теории и конструкции атомных бомб советскому правительству.Острая конкуренция между этими двумя странами во время холодной войны заставила их разработать более мощную термоядерную бомбу (также известную как водородная бомба или водородная бомба) и увеличить свои запасы ядерного оружия. В разгар этого соревнования Соединенные Штаты и Советский Союз вместе обладали многими тысячами ядерных боеголовок, которых было достаточно, чтобы многократно уничтожить все живое на Земле.

    Столкнувшись с растущей перспективой распространения ядерного оружия, президент США Дуайт Д.В 1953 году Эйзенхауэр запустил свою программу «Атом для мира», которая в конечном итоге предоставила невоенные ядерные технологии странам, отказавшимся от ядерного оружия. В 1957 году программа «Атом для мира» привела к созданию Международного агентства по атомной энергии (МАГАТЭ), организации Организации Объединенных Наций, продвигающей безопасное и мирное использование ядерных технологий. В ответ на растущую угрозу ядерной войны Договор о нераспространении ядерного оружия или Договор о нераспространении ядерного оружия (ДНЯО) был заключен Соединенными Штатами, Советским Союзом, Соединенным Королевством, Францией и Китаем. в 1968 г.Договор требовал от государств, обладающих ядерным оружием, предоставлять другим странам невоенные ядерные технологии и предпринимать шаги к собственному ядерному разоружению. Взамен государства, не обладающие ядерным оружием, обязались не передавать и не получать военные ядерные технологии и подчиняться правилам МАГАТЭ. Таким образом, цели ДНЯО были двоякими: предотвратить распространение ядерного оружия, не препятствуя развитию мирного использования ядерных технологий, и содействовать глобальному разоружению.Однако эти две цели оказалось труднодостижимым, потому что невоенные ядерные технологии иногда можно было перенаправить на военное использование, а также потому, что обладание ядерным оружием служило мощным сдерживающим фактором против нападения, от которого ядерные государства не хотели отказываться.

    Приобретение ядерного оружия такими развивающимися странами, как Индия (1974 г.), Пакистан (1998 г.) и Северная Корея (2006 г.) породило новые проблемы. Хотя развивающиеся страны могут приобрести ядерное оружие, им не хватает продуманной системы командования и контроля, которая ограничивала бы риск ядерной аварии и эскалации конфликта в таких странах, как Соединенные Штаты и Советский Союз.Аналогичные опасения возникли после распада Советского Союза в 1991 году, когда некоторые бывшие советские республики унаследовали часть советского ядерного арсенала. Многие эксперты предупреждали, что ни эти страны, ни ослабленная Россия не могут гарантировать безопасность своего ядерного оружия. В соответствии с Лиссабонским протоколом (1992 г.) Беларусь, Казахстан и Украина, а также Россия и США стали участниками договора СНВ (переговоры о сокращении стратегических вооружений) между США и бывшим Советским Союзом, а также бывшим Советским Союзом. республики согласились уничтожить или передать России все стратегические ядерные боеголовки на своей территории.

    Получите подписку Britannica Premium и получите доступ к эксклюзивному контенту. Подпишитесь сейчас

    Хотя эти примеры показывают, что бедные государства могут разработать атомную бомбу, программа создания ядерного оружия в целом остается сложным и дорогостоящим предприятием. Некоторые государства, такие как Ливия, пытались разработать ядерное оружие, но безуспешно; другие, такие как Аргентина и Бразилия, отказались от своих программ создания ядерного оружия; и одно государство, Южная Африка, добровольно демонтировало свое ядерное оружие и присоединилось к ДНЯО в 1991 году как государство, не обладающее ядерным оружием.

    alexxlab

    E-mail : alexxlab@gmail.com

    Submit A Comment

    Must be fill required * marked fields.

    :*
    :*